硼替佐米及其联合5-杂氮胞苷对t细胞淋巴瘤细胞中nf-kb,shp-1,jaks基因表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文硼替佐米及其联合5--杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞中NF--KB,SHP--1,JAKs基因表达的影响姓名：李丽媛申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：罗建民201203中文摘要‘硼替佐米及其联合5一杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞中NF—KB，SHP一1，JAKs基因表达的影响摘要目的：淋巴瘤是来源于淋巴细胞的实体恶性肿瘤，按照“世界卫生组织淋巴系统肿瘤病理分类标准"，目前已知淋巴瘤有近70种病理类型，大体可分为霍奇金淋巴瘤(皿)和非霍奇金淋巴瘤(M丑)两大类。在我国，霍奇金淋巴瘤占淋巴瘤的10％左右，而非霍奇金淋巴瘤占全部淋巴瘤病例的90％左右，并且发病率逐年升高

2、。非霍奇金淋巴瘤又分为B细胞型和T／NK细胞型两大类，其中T细胞淋巴瘤约占所有非霍奇金淋巴瘤的25％左右。硼替佐米(Bortezomib，万珂)是一种高选择性的26S硼酸盐蛋白酶体抑制剂，目前已经被应用于临床治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤。在肿瘤细胞中，硼替佐米主要通过对核转录因子(NF．rd3)等多种细胞内蛋白质发挥作用，已有研究证明，硼替佐米特异性地抑制蛋白酶体26S亚基的活性，明显减少抑制因子(ir．B)的降解，ird3和NF．r．B结合的增加，可以有效抑制NF．r．B的活性，减少NF．rd3进入细胞核诱导或上调多药耐药基因，抑制与细胞增殖相关的基因表达，从而抑制细胞过度增殖和诱

3、导细胞正常凋亡【1J。本课题前期研究已经证明，淋巴瘤患者及其细胞系中存在酪氨酸磷酸酶-l(SH2一containingtyrosinephosphatase．1，SHP．1)基因的表达减低或缺如，甲基化抑制剂5．杂氮胞苷(5-aza．C氓)可以通过诱导淋巴瘤细胞中SHP．1重新表达而抑制肿瘤细胞增殖，蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BTZ)增强5．杂氮胞苷对Jurkat细胞的去甲基化作用。已经证实，SHP．1能抑制JAKs激酶活性而负调控JAK／STAT信号通路，还可以通过蛋白酶体途径加速JAKs激酶的降解而发挥其促凋亡作用f2】。本实验研究硼替佐米作用于T细胞淋巴瘤Jurkat细胞后NF．K

4、B基因的表达情况。硼替佐米单药及其与5一杂氮胞苷联合作用于Jurkat细胞后，SHP．1及JAK家族成员JAKl，JAK2，JAK3，TYK2基因的表达情况，了解SHP．1在JAK／STAT通路中的作用，以及在T细胞淋巴瘤发病中的中文摘要作用。方法：本实验的研究对象为T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株。将细胞悬浮培养于10％胎牛血清(Fetalbovineserum，FBS)RPMI1640培养基中，取对数生长期的细胞转入6孔培养板，每孔lml含1X106个细胞，硼替佐米的浓度为lO，30，50nmol／L(共3孔)；硼替佐米10nmol／L+5．aza．CdR31xrnol／L(1孔)；

5、不加药对照一孔(共5孔)，5种不同处理组细胞均各设2个复孔。细胞和药物在37℃，5％C02饱和湿度条件下孵育24h，48h，72h后收获并洗涤，Trizol提取细胞总RNA，荧光实时定量PCR(real．timequantitativepoylymerasechainreaction，RQ．PCR)检测NF．vd3，SHP一1及JAK家族成员JAKl，JAK2，JAK3，TYK2基因的表达情况，并进行统计学分析。结果：1NF—r．B基因在硼替佐米作用的Jurkat细胞中的表达：RQ．PCR结果显示，相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞，呈时间依赖性，随着时间增加NF．rd3基因的表

6、达逐渐降低；在相同时间不同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞，NF．v．B基因表达呈剂量依赖性，随着剂量的增加其表达逐渐降低。P<0．05，有统计学意义。2硼替佐米和5．杂氮胞苷在Jurkat细胞中对SHP．1表达的影响：RQ．PCR结果显示，相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比，SHP．1mRNA平均表达水平逐渐升高，有显著差异，有统计学意义(P

7、t细胞24～72h后，Jurkat细胞中SHP—lmRNA表达水平增加，较单药时更明显。与硼替佐米单药作用时相比有统计学差异。3硼替佐米和5．杂氮胞苷在Jurkat细胞中对JAKs表达的影响：RQ．PCR结果显示，相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比，JAKsmRNA平均表达水平逐渐降低，有显著差异，有统计学意义(P