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时间:2019-03-03
《硼替佐米及其联合5-杂氮胞苷对t细胞淋巴瘤细胞中nf-kb,shp-1,jaks基因表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、河北医科大学硕士学位论文硼替佐米及其联合5--杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞中NF--KB,SHP--1,JAKs基因表达的影响姓名:李丽媛申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:罗建民201203中文摘要‘硼替佐米及其联合5一杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞中NF—KB,SHP一1,JAKs基因表达的影响摘要目的:淋巴瘤是来源于淋巴细胞的实体恶性肿瘤,按照“世界卫生组织淋巴系统肿瘤病理分类标准",目前已知淋巴瘤有近70种病理类型,大体可分为霍奇金淋巴瘤(皿)和非霍奇金淋巴瘤(M丑)两大类。在我国,霍奇金淋巴瘤占淋巴瘤的10%左右,而非霍奇金淋巴瘤占全部淋巴瘤病例的90%左右,并且发病率逐年升高
2、。非霍奇金淋巴瘤又分为B细胞型和T/NK细胞型两大类,其中T细胞淋巴瘤约占所有非霍奇金淋巴瘤的25%左右。硼替佐米(Bortezomib,万珂)是一种高选择性的26S硼酸盐蛋白酶体抑制剂,目前已经被应用于临床治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤。在肿瘤细胞中,硼替佐米主要通过对核转录因子(NF.rd3)等多种细胞内蛋白质发挥作用,已有研究证明,硼替佐米特异性地抑制蛋白酶体26S亚基的活性,明显减少抑制因子(ir.B)的降解,ird3和NF.r.B结合的增加,可以有效抑制NF.r.B的活性,减少NF.rd3进入细胞核诱导或上调多药耐药基因,抑制与细胞增殖相关的基因表达,从而抑制细胞过度增殖和诱
3、导细胞正常凋亡【1J。本课题前期研究已经证明,淋巴瘤患者及其细胞系中存在酪氨酸磷酸酶-l(SH2一containingtyrosinephosphatase.1,SHP.1)基因的表达减低或缺如,甲基化抑制剂5.杂氮胞苷(5-aza.C氓)可以通过诱导淋巴瘤细胞中SHP.1重新表达而抑制肿瘤细胞增殖,蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BTZ)增强5.杂氮胞苷对Jurkat细胞的去甲基化作用。已经证实,SHP.1能抑制JAKs激酶活性而负调控JAK/STAT信号通路,还可以通过蛋白酶体途径加速JAKs激酶的降解而发挥其促凋亡作用f2】。本实验研究硼替佐米作用于T细胞淋巴瘤Jurkat细胞后NF.K
4、B基因的表达情况。硼替佐米单药及其与5一杂氮胞苷联合作用于Jurkat细胞后,SHP.1及JAK家族成员JAKl,JAK2,JAK3,TYK2基因的表达情况,了解SHP.1在JAK/STAT通路中的作用,以及在T细胞淋巴瘤发病中的中文摘要作用。方法:本实验的研究对象为T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株。将细胞悬浮培养于10%胎牛血清(Fetalbovineserum,FBS)RPMI1640培养基中,取对数生长期的细胞转入6孔培养板,每孔lml含1X106个细胞,硼替佐米的浓度为lO,30,50nmol/L(共3孔);硼替佐米10nmol/L+5.aza.CdR31xrnol/L(1孔);
5、不加药对照一孔(共5孔),5种不同处理组细胞均各设2个复孔。细胞和药物在37℃,5%C02饱和湿度条件下孵育24h,48h,72h后收获并洗涤,Trizol提取细胞总RNA,荧光实时定量PCR(real.timequantitativepoylymerasechainreaction,RQ.PCR)检测NF.vd3,SHP一1及JAK家族成员JAKl,JAK2,JAK3,TYK2基因的表达情况,并进行统计学分析。结果:1NF—r.B基因在硼替佐米作用的Jurkat细胞中的表达:RQ.PCR结果显示,相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞,呈时间依赖性,随着时间增加NF.rd3基因的表
6、达逐渐降低;在相同时间不同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞,NF.v.B基因表达呈剂量依赖性,随着剂量的增加其表达逐渐降低。P<0.05,有统计学意义。2硼替佐米和5.杂氮胞苷在Jurkat细胞中对SHP.1表达的影响:RQ.PCR结果显示,相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比,SHP.1mRNA平均表达水平逐渐升高,有显著差异,有统计学意义(P7、t细胞24~72h后,Jurkat细胞中SHP—lmRNA表达水平增加,较单药时更明显。与硼替佐米单药作用时相比有统计学差异。3硼替佐米和5.杂氮胞苷在Jurkat细胞中对JAKs表达的影响:RQ.PCR结果显示,相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比,JAKsmRNA平均表达水平逐渐降低,有显著差异,有统计学意义(P
7、t细胞24~72h后,Jurkat细胞中SHP—lmRNA表达水平增加,较单药时更明显。与硼替佐米单药作用时相比有统计学差异。3硼替佐米和5.杂氮胞苷在Jurkat细胞中对JAKs表达的影响:RQ.PCR结果显示,相同浓度的硼替佐米作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比,JAKsmRNA平均表达水平逐渐降低,有显著差异,有统计学意义(P
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