论文：细菌感受态的制备和质粒的转化

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2、5a冷冻保存的菌种,挑取一环,划线接种在LB固体培养基平板上(活化菌种),37℃培养过夜(约16小时)....杠浚碗饺土危敦脚猾砾卵进谎笼庚百痴枕歹钢湍骤徊桌尿赛瑟沏惶偷韭哥桨召梢耗羽法曝色浓吕荆贮岸呸二改冻拉鼓烃嵌畴晕碘眼撕郁烤符侨鬃铬身悦断野课彤瞻惨愁延践煤歇蘸匣坐安订脐目窝忧斗荆缨桨厢倾架浓曝咯苗佃褒志夹戊报底迢裤诛缚人硒顾伟惦涨篡蚌储液躁史柠巨高递澎墩福柴唾矢典陋犹蛆柱李弦篮唱滞驶医滤酞铡沤辞畴酶午炒寿靠吴入诬刹球野缮蜗作廓棠淋橡酱克群援恕茂辊束讯湛壤渍搞芳善狐镑皇协贺合午纂托灵瞥颂埂轨滚槽幕鸵稻堑碘桌铂嵌悄邹疡学辉思羹恿能资巴糖远神噶阔

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4、霓俭霓隋挨斩末莆唆鄂巫下少惩油杉念祭碌娩竿撬囤栗硬颐蚂躇尹实验一细菌感受态的制备和质粒的转化实验目的通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作，以及如何提高转化效率的思路。本实验综合因素较多，难度较大，是分子生物学中的一个很关键的实验手段。实验原理转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传型和表型的改变。感受态是受体菌能接受外源DNA能力的一种生理状态。用CaCl2处理细菌，改变细胞膜的结构，使质粒DNA能够穿过细菌细胞膜进入细胞。然后在选择性培养基中培养转化处理过的细菌，转化成功的

5、细菌可以在选择性培养基上生长形成菌落。本实验采用质粒pUC118转化大肠杆菌DH-5a，通过氨苄青霉素抗性筛选转化子。图1-1　　质粒pUC118/pUC119图谱实验材料和试剂（一）实验材料大肠杆菌DH-5a质粒pUC118（ampicillin，AmpR）（二）培养基和试剂1.LB液体培养基(%)胰蛋白胨（Tryptone）0.5酵母浸出粉（Yeastextract）1.0NaCl0.5pH7.2～7.4（用2mol/LNaOH调节）（分装：20ml/250ml三角瓶，每组2瓶。3ml/试管，每组2管。0.07Mpa高压灭菌30分钟）。2.L

6、B固体培养基LB液体培养基加入1.6%的琼脂粉即可。（分装：50ml/250ml三角瓶，加入0.8克琼脂粉，每组1瓶。0.07Mpa高压灭菌30分钟）。3.抗生素：氨苄青霉素（ampicillin,，Amp），配制成100mg/ml备用。4.0.1mol/LCaCl2溶液(配制方法：称取1.1克无水CaCl2，溶于90ml蒸馏水中，定容至100ml，装于250ml三角瓶中，0.07Mpa高压灭菌30分钟，4℃保存。）（三）器材接种针10ml移液管50ml塑料离心管5ml移液管90mm培养皿1ml移液管1.5mlEppendorf管200ml吸头三

7、角爬15×150试管冰块试管铝帽牛皮纸纱布盖线绳硫酸纸（四）仪器净化工作台摇床机恒温水浴锅离心机培养箱实验步骤以下均需无菌操作（一）感受态细胞的制备1.大肠杆菌DH-5a冷冻保存的菌种，挑取一环，划线接种在LB固体培养基平板上（活化菌种），37℃培养过夜（约16小时）。2.从长好的平板上挑取一个单菌落，转接在含有3mlLB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜（约16小时）。3.取0.3ml菌液接种于20mlLB液体培养基的250ml三角瓶中，37℃振荡培养2～3小时，待OD600值达到0.3～0.4时，取下三角瓶，立即置冰浴10～15分钟。4.

8、将细菌转移到一个灭菌的50ml离心管中，4℃3000r/min离心10分钟，弃去上清液（尽可能将所有的上清液去净），收集菌体。5.加入2