去氧鬼臼毒素抗肿瘤细胞作用机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文去氧鬼臼毒素抗肿瘤细胞作用机制研究姓名：毛积分申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：陈虹201203中文摘要去氧鬼臼毒素抗肿瘤细胞作用机制研究摘要目的：本文研究去氧鬼臼毒素(DPPT)对其肿瘤细胞株(KB细胞)抑制的作用，并探讨作用的机制。方法：1MTT法和SRB法检测DPPT的体外抗肿瘤活性。MTT法和SRB法测定DPPT体外对各肿瘤细胞(KB、Hela、LOVO、HepG．2、SKV03、A549、K562)及正常细胞(vEc、MC一3T3)的IC50值或G150值。2光学显微镜下和荧光

2、显微镜下观察DPPT对KB肿瘤细胞株从形态学上结构的变化。3琼脂糖凝胶电泳分析DPPT对KB细胞染色体DNA断裂的影响。4流式细胞术分析DPPT对KB细胞周期及其凋亡率的影响。5RT-PCR检测DPPT在不同浓度(2nmol／L、4nmol／L、8nmol／L)对KB细胞p53、bcl一2、bax、easpase一3、p21、PCNA、cyclinA、cyclinBlmRNA表达的影响。6免疫细胞化学法和Western．blot法检测DPPT在不同浓度下(2nmol／L、4nmol／L、8nmol／L)对KB细胞PC

3、NA蛋白表达的影响。结果g1DPPT的体外抗肿瘤活性MTT和SRB法测定结果表明，DPPT对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用，IC50值为6．9～2．9nmol／L；对t03(人口腔上皮鳞癌细胞株)有非常显著抑制作用，IC50值为5．6+4．0nmol／L，SRB法检测到KB细胞G150值为4．O～1．2nmol／L显著优于阳性对照药依托泊苷(VP．16)，且具有抗多药耐药的活性。DPPT对人正常血管内皮细胞(VEC)和人成骨细胞(MC一3T3)显示具有较低的毒性，具有较好的选择性。通过对KB细胞生长曲线的观察到，DP

4、PT对KB细胞具有生长抑制作用，呈剂量依赖性，表明DPPT对肿瘤细胞生长抑制作用强于阳性对照药依托泊苷(VP．16)。2DPPT诱导肿瘤细胞凋亡‘中文摘要Giemsa染色和Hoechst33342荧光染色结果显示随着给药浓度的不断增大，细胞呈现出的凋亡形态愈来愈明显，并最终变成大小不等的凋亡小体；经DNA琼脂糖凝胶电泳后所出现的梯子状条带显示出典型“DNALadder"梯子图样；经流式细胞仪检测，结果显示出，凋亡细胞的比例会随着DPPT浓度的升高及其作用时间的延长而增加，呈现～定剂量的时间依赖性。以上结果均可以说明D

5、PPT能够诱导KB肿瘤细胞发生凋亡。3DPPT对肿瘤细胞(KB)周期的影响细胞周期分布结果显示高浓度8nmol／L的DPPT作用于KB细胞24h可将其细胞周期阻断在G2+M期；免疫荧光试验结果表明高浓度8nmoUL的DPPT可使KB细胞的绝大部分微管结构破坏，仅在核周残留少量点状不规则荧光。4DPPT对KB凋亡相关基因和细胞周期基因的测定RT-PCR结果显示不同浓度的DPPT(2、4、8nmol／L)作用于KB细胞24h后，可剂量依赖性地增3Np21、bax、p53、caspase一3、及eyclinA的mRNA表达

6、，同时降低bcl．2和cyclinB1mRNA的表达，与对照组相比有显著性差异(P

7、；PCNAI细胞凋亡英文摘要StudiesontumorcelllineactivitiesofDeoxypodophyUotoxinanditsmechanismofactionObjective：nlepaperstudiedDeoxypodophyllotoxin(DPPT)withtumorcells，anddiscussitsfunctionmechanisminitially．Methods：lDPPThasthestrongeranti-tumoractivenessbyMTTandSRBassayin

8、vitro．Inaseriesofexperiments，twelvetumorigenichumancells，includinghumanoralsquamouscarcinomacell(1④)，humancoloncarcinomacells(LOVO)，humancervicalcancercells(Hela)，humanovari