吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响

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1、博士学位论文论文题目吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响研究生姓名张奇指导教师姓名汪健专业名称儿科学研究方向新生儿感染与免疫论文提交日期2012年9月吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响中文摘要吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响中文摘要婴幼儿免疫功能发育未完善，容易受到各种病原体入侵，感染是新生儿死亡的主要原因之一。吞噬作用是宿主固有免疫抵御外来入侵病原微生物的一个关键因素。专职的吞噬细胞包括巨噬细胞和中性粒细胞。由吞噬细胞引起的吞噬作用和随后的病原体降解在宿主应对微生物感染的固

2、有免疫中发挥了枢纽的作用。本文将通过对婴幼鼠吞噬细胞杀菌功能及吞噬体成熟机制的研究，进一步阐明婴幼鼠在面对细菌感染时为何较成年鼠更为敏感。第一部分：小鼠细菌感染后的反应差异目的：通过小鼠脓毒症模型，观察成年鼠和婴幼鼠细菌感染后，其生存情况，炎症因子的释放和器官细菌清除率的异同，明确婴幼鼠是否较成年鼠对细菌感染更敏感。9方法：分别向2周和8周龄的C57BL/6婴幼鼠和成年鼠腹腔注射1.25×10CFU/kg8的活革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌或2.5×10CFU/kg的活革兰氏阴性菌伤寒沙门氏菌。观察小鼠生存率

3、，绘制生存曲线；同时视网膜动脉取血，测量不同时间点外周血TNF-α和IL-6浓度水平，并取外周血和肝，脾，肺等组织，研磨成匀浆后涂板计数细菌菌落。结果：1）腹腔注射活金黄色葡萄球菌后，至观测期结束时，婴幼鼠较成年鼠存活率明显降低（p=0.0094）。而注射活伤寒菌后，婴幼鼠死亡率较成年鼠更高（p=0.0062）。2）经流式细胞仪检测，2h和6h后，外周血TNF-α和IL-6浓度水平分别达到峰值，而婴幼鼠较成年鼠有所降低，但没有统计学差异。3）腹腔注射活菌后24小时，婴幼鼠外周血，肝，脾及肺内菌落计数均较成

4、年鼠增多（p＜0.05），而48小时后，菌落计数增多更明显（p＜0.05）。结论：在应对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌感染时，婴幼鼠均表现出细菌清除功I中文摘要吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响能的受损，与死亡率升高的结果相符。关键词：婴幼鼠，脓毒症，生存率，炎症因子，细菌清除第二部分：细菌感染时小鼠中性粒细胞趋化性的研究目的：通过检测婴幼鼠和成年鼠腹腔注射革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌后腹腔中性粒细胞和巨噬细胞数量变化，及中性粒细胞趋化性的变化，明确婴幼鼠中所观察到的推迟的细菌清除的可能的原因。9方法

5、：1）分别向2周和8周龄的C57BL/6婴幼鼠和成年鼠腹腔注射1.25×108CFU/kg的活革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌或2.5×10CFU/kg的活革兰氏阴性菌伤寒沙门氏菌。检测腹腔灌洗液中中性粒细胞和巨噬细胞比率；2）分离和纯化的中性粒细胞，检测其表面趋化性受体CXCR2，并在添加或不添加趋化诱导剂CXCL2后，评估中性粒细胞趋化性；3）检测GRK2在细菌感染时的作用。结果：1）感染金葡菌和伤寒沙门氏菌12小时和24小时后，成年鼠腹腔中性粒细胞明显增加。相反，婴幼鼠在应对细菌感染时，招募至腹腔的中性粒

6、细胞明显减少（p＜0.05），而腹腔巨噬细胞数在成年鼠和婴幼鼠无明显差异；2）婴幼鼠中性粒细胞CXCR2构成性表达较成年鼠少（p＜0.05），而感染后，成年鼠中性粒细胞CXCR2表达下调，而婴幼鼠的下降更明显（p＜0.05），与CXCR2表达降低相似，无论感染或非感染时，婴幼鼠均表现出趋化物CXCL2的明显降低（p＜0.05）；3）不论是否经细菌刺激，成年鼠与婴幼鼠GRK2表达均没有区别，而加入GRK2的抑制剂后，虽然趋化物CXCL2在经TLR4的拮抗剂LPS和TLR2拮抗剂BLP刺激后表达上调，但是婴幼

7、鼠中性粒细胞上CXCL2仍然低表达于成年鼠（p＜0.05）。结论：1）细菌感染时，婴幼鼠外周血循环中中性粒细胞向感染处的迁移不足；2）婴幼鼠中性粒细胞表面趋化性受体CXCR2表达少，而感染后，其表达进一步下降；3）GRK2表达与中性粒细胞表面受体CXCR2和趋化性降低无关。关键词：婴幼鼠，中性粒细胞，巨噬细胞，趋化性，CXCR2，CXCL2，GRK2II吞噬细胞抗菌能力不足对婴幼鼠细菌易感性的影响中文摘要第三部分：小鼠吞噬受体表达和吞噬细胞胞内细菌杀伤能力研究目的：通过检测吞噬细胞表明吞噬受体表达情况，以

8、及胞内细菌杀伤能力，进一步阐明婴幼鼠对细菌感染的敏感性增强和细菌清除能力的延迟。方法：1）流式细胞仪同时检测婴幼鼠和成年鼠巨噬细胞和中性粒细胞表面两种吞噬受体，补体受体3（CR3）和FcγIII/II受体（FcγR）的表达情况，并检测经LPS和BLP刺激后巨噬细胞两种吞噬受体表达情况；2）将PE标记金黄色葡萄球菌或伤寒沙门氏菌与小鼠中性粒细胞和巨噬细胞共培养，15和30分钟后流式细胞仪检测，吞噬细胞内细菌荧光强度；3）将活金黄