猪源和人源2009h1n1流感病毒毒力比较研究

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1、华中农业大学硕士学位论文猪源和人源2009/H1N1流感病毒毒力比较研究姓名：贾广敏申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：金梅林201206猪源和人源2009／HINl流感病毒毒力比较研究摘要第1株2009／H1N1大流行流感病毒在2009年4月被分离出来后，关于2009／H1N1流感病毒由人向猪传播的报道越来越多。在猪流感流行病学调查中，本实验室从猪群中分离到4株2009／H1N1流感病毒。为了进一步研究这些病毒对哺乳动物的致病性，我们分别评价了从猪体内分离到的2009／H1N1流感病毒(p．H1N1)、从人体内分离到的2009／H1NI流感病毒(h-H1N1)对

2、小鼠模型的致病性。结果显示，两株P-HINl病毒A／swine／Nanchang／3／2010和A／swine／Nanchang／F9／2010(H1N1)在小鼠肺脏中复制能力更强，有两株病毒甚至能导致小鼠大量死亡。组织病理学检测发现，感染P．H1N1的小鼠肺脏出现不同程度的病理损伤，有中度甚至严重的细支气管炎，偶尔伴随有细支气管上皮组织细胞的坏死，并有轻微的肺泡炎。对感染小鼠的肺脏细胞因子检测发现，P。H1N1能够更显著地诱导炎症因子表达，而检测到的抗炎因子和抗病毒因子表达较低。为了找到病毒与BALB／C小鼠致病性之间的关系，本研究比较了p-H1N1，h．H1N1和经典

3、的H1N1亚型SIV(c．H1N1)在氨基酸水平上的差异，并在HA，PA，PB2和NSl蛋白上发现了6个共同的氨基酸位点突变：HA：E103D、P145S；NSl：V123I；PB2．．1588T；PA：V70A、E547D。总之，这些研究表明与h-H1N1相比，P．H1N1感染小鼠模型后表现为毒力增强。鉴于2009／H1N1流感病毒是从猪体内分离到的，通过比较P．H1N1与c．H1N1对BALB／C小鼠的致病性差异、在猪肺泡巨噬细胞(Ⅳ蝴)上的增殖差异以及检测感染PAM细胞后炎症细胞因子、凋亡相关因子、细胞黏附相关分子和抗病毒细胞因予表达水平的变化。结果发现与c．H1N

4、1相比，P．H1N1能够显著降低小鼠体重，在PAM细胞上增殖能力更强。PAM上细胞因子检测发现，感染后3h和6h，二者诱导产生的炎症因子如白介素类细胞因了，无显著差异。感染后12h，c．H1N1对所有细胞因子的诱导能力都比P．H1N1强。但是，在感染后6h，与c．H1N1相比，P—H1N1病毒能够诱导III型干扰素IL．29的大量产生；而感染后12h和24h，c-H1N1却能导致IL．29的大量表达。IL．29作为最近新发现的III型干扰素，其在宿主抗病毒天然免疫方面的功能越来越重要。本研究中P．H1N1感染后6h导致IL一29大量产生参与宿主抗病毒防御应答，而在感染后期

5、又恢复正常水平，这可能是后期病毒蛋白大量表达进而拮抗IL一29的表达。关键词：甲型流感、猪、毒力、细胞因子华中农业大学2012届硕士研究生学位论文AbstractSincetheemergenceofthepandemic(Hml)2009Vil'tls(2009PAINl)inApril2009，thecasesoftransmissionfromhumanstopigshavebeenreportedfrequently．Tobetterunderstandthecomparativepathogenesisofthenovelstrainsisolatedfromp

6、igsandthehumanisolate，weinoculatedmiceintranasally淅mtheviruses，andmonitoredtheirmorbidity,mortality,viralreplication，cytokineproductionandlunghistology．Resultsshowedthatpigisolatesreplicatedefficientlyinthelungsandcouldevencauselethaldisease．Cytokinesexpressionanalysisindicatedthatmicecha

7、llengedwiththelethalstrainscouldinducehigherproductionofcytokinesthanothervirusesattheearlystage．Furthermore，thenovelisolatesbelongedtotheclade7sublincageof2009／H1N1viruses，ofwhichsixcommonmutationswerefoundamongtheviralproteins：HA：E103D，P145S；NSl：V123I；PB2：1588T；PA