猪源大肠杆菌耐药性与毒力因子分析、aida-i克隆与表达

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1、分类号：墨墨§2：互密级：玉单位代码：—』嘟5学号：21017055胁夕≥Z．掌硕士学位论文中文论文题目：⑧英文论文题目：Investigationonrelationshipbetween．—resist—ance—andvirulencefactorsharboredinEcoli—from—Di21ets,cloningandexpressionOfAⅢA_I申请人姓名：韭登指导教师：差主基到塾拯专业名称：基础兰医堂研究方向：簦医荭堡堂鱼耋垄堂所在学院：动物型堂堂医猹鎏太题盘董盈荭丝生耋应国王佥盘△堡△：兰数杰隆童塞垫⑧论文作者签名：强逢指导教师签名

2、：掣论文评阅人1：友维缝熬援逝江态堂动塑型堂堂陵评阅人2：奎里莶硒窒基逝、江态堂麴塑叠堂堂医评阅人3：毖在副巫塞旦逝婆笪壅科院查筮璺：医压答辩委员会主席：韭茎歪塾撞逝堑态堂麴型堂瞳委员1：塑松堡塾拯逝堑盔堂麴型堂陵委员2：堂茎歪熬援逝堑态堂动登堂医委员3：塾爱羞熬援逝江太堂麴型堂陵要员4：昱l旦生副熬攮逝选太堂麴型堂陵委员5：羞生基副熬援逝江太堂动型堂医Author’ssignature：一‘●‘·Supervisor7Ssignature：ExternalReviewers"．ZheiiangAcademyofAgriculturalSciences．E

3、xaminingCommitteeChairperson：ZHANGCai-qiao,CollegeofAnimalSciencesZheiiangUniversity，ExaminingCommitteeMembers：HUSong-hua,CollegeofAnimalSciencesZheiiangUniversity．．．．．．．．．．．ZHANGCai-qiao,CollegeofAnimalSciencesZheiiangUniversity!：丛』△i：鸯蛩堇g，￡Q!!曼g曼Q￡鱼区!i望逊S曼i星塾曼曼墨i!鱼曼ji垒坠g!i堕叵Y曼堡煎

4、YWUJiu-sheng,CollegeofAnimalSciencesZhejiangUniversity．．．．．．．．．JIANGZhong-qi,CollegeofAnimalSciencesZheiiangUniversity．．Dateoforaldefence：也避2：2Q12浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑豳螳或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对

5、本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位做作者签名：弓轿倚签字日期：≯。f1年6月咿学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑蛰拦有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑窿螳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：弓旨签字日期：讪I>年6导师签名：多呼缪月((1日签字魄力f舟易月浙江大学硕士论文摘要仔猪大肠杆菌性腹泻是规模化猪场的常见病和多发病，是经济损失

6、的重要原因。产肠毒素大肠杆菌是其主要的病原菌，毒力因子是致病力的标准。了解大肠杆菌毒力因子变迁以及与耐药性间可能存在的关系对仔猪大肠杆菌性腹泻发病机制的研究具有重要的意义。近年来未检测到任何菌毛的菌株在致腹泻大肠杆菌中越来越普遍，这可能与仔猪大肠杆菌性腹泻的防控一般是使用针对菌毛抗原的疫苗有关，为新的毒力因子的出现和携带提供了选择压力，因此新型毒力因子的研究有助于采取正确有效仔猪大肠杆菌性腹泻的防控措施。本文通过直肠棉拭采集浙江省规模猪场腹泻仔猪病料，经细菌分离纯化、形态学结合16SrRNA的PCR鉴定以及小鼠致病性试验得到124株病原性大肠杆菌基础上，采

7、用K-B法及耐药性专用软件WHONET测定并分析其对抗菌药物的耐药性，应用PCR分析分离株毒力因子，通过Logistic分析毒力因子与耐药性的相关性。AIDA．I是124株致仔猪腹泻大肠杆菌临床分离株中分离得到的新型毒力因子，由质粒上的a／dA基因编码。所有分离株中共检测到3株aidA阳性菌株，选取其中一株不含上述检测的任何毒力因子的分离株X1123对aidA基因克隆和蛋白表达。参照大肠杆菌2787菌株中aid,4基因的核苷酸序列合成1对引物，对X1123aidA全基因进行了PCR扩增，扩增产物连接到pMD一18T载体上进行序列测定后，CVV分析蛋白保守性

8、以及BLAST分析其同源性；应用基因体外重组技术，将回收纯化aid