disulfiram联合cu对raji细胞及其裸鼠移植瘤生长影响及分子机制的研究

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1、硕士学位论文Disulfiram联合Cu对Raji细胞及其裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制的研究硕士研究生：查洁指导教师：徐兵教授摘要背景Burkitt’S淋巴瘤是一种侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤，疾病进展快，死亡率高。虽然随着化疗及免疫治疗等研究的进展，Burkitt’S淋巴瘤患者的治疗效果已有明显改善，但复发及大剂量化疗的毒副作用仍是影响淋巴瘤肿瘤疗效进一步提高的主要障碍；而新的分子靶向治疗药物也存在价格昂贵和耐药问题，从价廉且毒副作用小的传统药物中开发具有抗淋巴瘤活性的“新用途"越来越引起重视。Disulfiram(DS)是一种能够抑制醇脱氢酶的二

2、硫代氨基甲酸盐药物，已经在临床上广泛应用于抗酗酒，安全低毒且价格低廉。已有研究报道DS还具有抗肿瘤效应，它对乳腺癌、结肠癌等多种实体肿瘤细胞均具有抑制增殖和诱导凋亡的作用，另外，我们过去的研究也证实DS对白血病细胞具有抗肿瘤作用。DS作为一种二价金属离子螯合物，能够与Cu离子螯合形成DS／Cu复合物，DS／Cu能显著提高DS诱导肿瘤细胞凋亡作用。但有关DS及DS联合Cu对淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响及分子机制尚不明确，因此需进一步探索其作用及分子机制。有关DS抗肿瘤作用机制的研究近年取得了不少新进展，尤其在促凋亡机制方面，发现与多条信号传导通路有关。活

3、性氧(ROS)包括过氧化氢(H202)、超氧阴离子(02。)、羟自由基(OH．)及脂质过氧化物等，ROS不仅可作为一种毒性物质介导炎性损伤，近年发现它还是信息家族分子中的重要成员之一，对摘要细胞具有广泛的调节功能，在细胞凋亡中具有重要意义。ROS是细胞凋亡的早期信号，它可作用于线粒体，促使线粒体膜通透性改变、细胞色素C释放，还能与caspase9前体、ATP／dATP形成凋亡体，然后激活caspase3、easpase9，进而诱发easpase级联反应，使DNA断裂，引起细胞凋亡，而损伤的线粒体能产生更多活性氧，进一步引起细胞凋亡。研究表明肿瘤细胞R

4、OS水平略高于正常细胞，但由于有效的抗氧化机制的存在，肿瘤细胞对相对高水平的ROS是可以耐受。但在刺激信号作用下ROS进一步升高，可触发线粒体跨膜电势降低，使线粒体释放细胞色素C而诱导细胞凋亡。C．Jun氨基末端激酶(ⅢK)是MAPK重要成员之一，JNK也是实现细胞凋亡激活的通路之一，活化的JNK能诱导细胞凋亡，特别是各种应激导致的细胞凋亡。C-jun蛋白是JNK的作用底物，在外界作用刺激下，JNK表达上调或磷酸化水平上调将通过诱导C．Jun蛋白的氨基末端发生磷酸化，作为凋亡信号传递到细胞核内部，诱导细胞凋亡发生。在众多的外界应激因素中活性氧是非常常

5、见的一种，近来研究发现ROS的大量产生使得JNK持续激活，最终导致细胞由生存走向死亡。因此JNK介导的信号转导途径及活性氧在这一途径中的作用可能是DS诱导淋巴瘤细胞凋亡的一个重要分子机制。在多种肿瘤细胞中，NF．KB是活化的，NF．KB能够调控许多对肿瘤细胞存活、分化和凋亡非常重要的基因的表达。通常所指的NF．KB为P50／P65异源二聚体，调控下游一系列抗凋亡基因的表达。抑制P65的活性可抑制由NF．KB所启动的基因转录，使细胞的生长受到抑制，最终诱导细胞发生凋亡。已有研究发现DS／Cu可普遍抑制NF．KB的表达水平，从而诱导乳腺癌细胞凋亡。另外，

6、有研究报道ROS可抑制NF．KB的激活。因此，ROS抑制NF．KB的活化可能增强JNK活化的促凋亡作用。Nrf2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子，生理状态下Nr[2与胞质蛋白伴侣分子keapl结合使活性处于相对抑制状态，氧化应激作用下导致Nrf2与Keapl解耦联，活化Nrf2转移入核内，调控其下游第1I相解毒酶、抗氧化酶Ⅱ硕士学位论文及某些药物转运泵等靶基因的表达，保护基因免受损伤，与肿瘤耐药密切相关。而研究发现高水平的ROS可破坏具有抗氧化作用的转录因子Nrf2活性，因而进一步增强ROS介导的细胞凋亡。促进ROS生成及抑制Nrf2活性有望成

7、为抗肿瘤治疗的有效方法之一。本研究以Raji细胞及雌性、四周龄BALB／C裸鼠为研究对象，研究DS及DS／Cu对Raji细胞生长和凋亡的影响及其与ROS／Nrf2、JNK及NF．1出通路的关系；同时进一步观察DS及DS／Cu对Raji细胞BALB／C裸鼠移植瘤生长的影响，为将来临床应用奠定坚实的实验基础。目的本课题以Burkitt’S淋巴瘤细胞株Raji细胞和BALB／C裸鼠为研究对象，探讨DS／Cu能否在体外诱导Raji细胞凋亡并抑制其增殖，明确DS／Cu对Burkitt’S淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的影响。进一步从ROS／Nrf2、JNK、以及NF．r

8、,B通路探讨其潜在的分子机制。方法l、细胞株：人B细胞淋巴瘤(Burkitt’s)细胞株Raji。2、实验动