1,25-二羟基维生素d3对慢性结肠炎小鼠脾脏免疫功能的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文1，25--二羟基维生素D3对慢性结肠炎小鼠脾脏免疫功能的影响姓名：吴慧申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张晓岚201203中文摘要1，25．二羟基维生素D3对慢性实验性结肠炎小鼠脾脏免疫功能的影响摘要溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，uc)是一种慢性非特异性肠道炎症，具体发病机制尚不明确，免疫调控失衡引发的异常免疫反应被认为是UC发病机制中最重要的部分。大量实验证实，异常抗原激活效应T细胞及其亚群，介导T辅助(Thelper,Th)l型、Th2型和Thl7型免疫反应，分泌大量炎症因子，如肿瘤坏死因子．a(

2、tumornecrosisfactor-a，TNF一仪)、丫一干扰素(interferon-丫，IFN-y)、白介素(interleukin，IL)一6和IL．17等，与炎性细胞及其他炎性介质一起引发固有免疫应答。此外，抗原提呈细胞，如树突细胞和巨噬细胞等可以将抗原呈递至潘氏小结和肠系膜淋巴结等次级淋巴器官，进一步诱导适应性免疫应答的发生。脾脏是最大的外周免疫器官，是机体发生特异性细胞免疫和体液免疫的中心。众多研究发现，实验性脑脊髓炎和类风湿关节炎等免疫性疾病都存在脾脏免疫细胞的活化，炎性因子数量的增加，这也支持异常免疫反应是这类疾病的共同发病特点。I

3、，25．二羟基维生素D3(1，25．dihydroxyvitaminD3，1,25(OH)2D3)是维生素D的活性代谢产物，不仅对骨骼的生长发育不可或缺，对细胞的生长分化、免疫系统和中枢神经系统的功能也有重要的调节作用。在l型糖尿病、类风湿关节炎的动物模型中发现，1,25(OH)2D3及其类似物能预防或抑制这类疾病的发生和发展。因此我们推测，1,25(OH)2D3可能通过免疫调节作用对结肠炎的发病起到抑Iii矛I治疗作用。目的：探讨1,25(OH)2D3对右旋葡聚糖硫酸钠(dextransodiumsulfate，DSS)诱导的慢性实验性结肠炎小鼠脾脏

4、免疫功能的影响。方法：①30只雄性C57BL／6小鼠按随机数字表随机分入Control组、DSS组和DSS+VD组，每组10只。Control组持续饮用蒸馏水；DSS组和DSS+VD组间断饮用2％DSS，时间段为分别为第1～5天、第8～12天、第15-19天、第22～26天、第27和第28天，其余时间饮用蒸馏水。造模第14天起开始干预：DSS+VD组给予1,25(OH)2D3(O．2}tg／25∥天)灌胃，中文摘要干预14天；Control组与DSS组给予等体积PBS灌胃干预14天，第29天处死动物。②每天观察小鼠精神状态、体重变化、活动情况、毛发光泽

5、度、进食以及大便性状等，评估疾病活动指数(diseaseactivityindex，DAI)。③观察脾脏形态学改变，记录脾脏重量和长度，计算脾脏指数变化。④应用苏木素伊红(hematoxylinandeosin，HE)染色观察脾脏组织病理学改变。⑤分离脾脏单个核细胞并计数，应用流式细胞术(fluorescenceactivatedcellsorting，FACS)检测巨噬细胞和树突细胞的比例，同时采用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测脾脏单个核细胞分泌IFN吖、TNF．0【、IL-'17和I

6、L．6的水平。⑥应用免疫组织化学染色和Real．timefluorescentquantitationPCR(Real．timeQ．PCR)技术检测脾组织中IFN．Y、TNF．Q、IL．17和IL．6的分布及其mRNA的水平。结果：①与Control组相比，DSS组和DSS+VD组小鼠体重显著下降(15．50％4-1．50％w0．00％4-O．00％，P<0．05)，经1,25(OH)2D3干预后，DSS+VD组体重较DSS组显著回升(5．20％4-0．53％w19．60％4-1．82％，P

7、DAI评分逐渐升高，经1,25(OH)2D3干预后，DSS+VD组DAI评分显著降低(3．774-O．36w1．79q-O．19，P

8、)。DSS+VD组脾脏较DSS组体积减小，切面脾小结不清晰，脾脏重量与DSS组相比下降(0．0