microrna-224在大肠癌中的表达及其功能研究

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2、表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名≥铬留彩导师签h≥年17月均Et

3、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8研究论文rrficroRNA．224在大肠癌中的表达及其功能研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结

4、果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33综述microRNA与肿瘤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47个人简历⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48中文摘要microRNA．224在大肠癌中的表达及其功能研究摘要目的：通过TaqmanrealtimePCR技术检测microRNA．224(miR-224)在大肠癌癌组织、相应正常粘膜中的表达水平，分析其表达与大肠癌患者临床病理特征之间的关系。同时进一步应用平板克隆形成实验、MTT比色分析法以及流式细胞技术等方法检测miR-224对结肠癌细胞增殖、凋亡等过程的影响。探讨miR-224作为肿瘤标记物对结直肠癌的诊断价值，进一步阐明miR-224在肿瘤发生发展过程中的生物功能，以便为大肠癌的早期诊断、治疗提供理论和实验依据。方法：1收集2

6、011年10月至2012年10月河北医科大学第一医院、河北医科大学第四医院的57例大肠癌患者肿瘤组织及对应无瘤切缘正常粘膜新鲜标本。2应用Taqman实时荧光定量PCR方法检测癌组织及正常黏膜组织中miR-224的表达水平，分析miR-224的表达与大肠癌临床病理特征的关系。3选取8种结肠癌细胞株(SW620、SW480、SWl116、HCTl16、HT29、DLDl、LOVO、Caco．2)进行培养，在各细胞株中检测miR-224的表达情况，并与正常组织黏膜中的表达进行比较。4比较miR-224在结肠癌细胞株HCTll6p53岍细胞和HCTll6p53-／-

7、细胞中二者的表达差异，分析其与p53基因的关系。5在结肠癌细胞株HCTl16细胞株中转染miR-224，将转染miR-224模拟物的作为实验组，同时设立对照组(转染阴性对照试剂)及空白组，转然后48小时检测三组细胞中miR-224的表达水平。6通过平板克隆形成试验观察转染miR-224前后细胞集落形成情况。转染miR-224后ld、2d、3d、4d、5d分别应用MTT比色分析法检测5个时段的OD值，绘制细胞生长曲线以观察细胞增殖改变情况。7应用流式细胞技术检测转染前后细胞凋亡的变化情况。8应用spssl3．0软件对数据进行统计分析，数据以中位数(四分位数中文摘

8、要间距)或均数-1-标准差表示，两组间配对样本采用Wilcoxon检验或t检验，两组间独立样本采用Mann—Whimey检验，多组间比较采用单因素方差分析，均以P<0．05为差异有统计学意义。结果：1miR-224在57例大肠癌癌组织及对应无瘤切缘正常粘膜中的表达水平分别为1．812(0．8685，4．653)和0．4073(0．1870，0．8515)，大肠癌癌组织中的表达较正常黏膜组织显著上调(尸<0．0001)。2miR-224的表达水平均与大肠癌患者的病理分型密切相关，即直肠癌组织中的表达明显高于结肠癌(P=0．0215)，Dukes分期为C，D期的患

9、者明显高于A，B期的患者(P=0．02