microrna-430靶向调控cxcr7对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级10533公珏MicroRNA．430靶向调控CXCR7对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究ThestudyonrolesofmiR-430targetregulatedCXCR7inthebiologicalbehaviorofbladdercancercellsandtheircorrespondingmechanisms名：刘磊业：临床医学向：外科学所)：湘雅二医院师：赵晓昆教授论文答辩日期一三■l答辩委员会主中南大学二。一三年五月姓专方系教者科究竞导作学研学指

2、原创性声明4llIHilttllllEIllltlIIHllElli((1l{Y2421696本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：j扯年』月旦日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国

3、家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储签名：■生翩签名壑些吼坐年』月率博士学位论文中文摘要MicroRNA-430靶向调控CXCR7对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究摘要目的：膀胱癌是人类常见的恶性肿瘤，然而其增殖和侵袭的分子机制依旧不明。MicroRNAs(miRNAs)是一类微小的内源性非

4、编码的RNA，通过与靶位点mRNA的3’端非翻译区UTR相互作用来抑制基因的表达。新近的数据表明，miRNAs在各种生物过程，包括人类癌症的发生发展侵袭转移的调控中发挥着重要的作用。mirna．430的研究主要是在斑马鱼上进行研究，miR．430已被证明与斑马鱼的早期胚胎发育有重要关系。然而，mir一430在涉及人类恶性肿瘤的调控上暂时没有报道。CXCR7是趋化因子SDF．1a即CXCLl2的受体，其是一种具有7次跨膜的基质蛋白。CXCR7的高表达被很多研究报道在肿瘤的发生发展侵袭转移中有增强作用，建议CXCR7

5、作为癌症治疗中一个有吸引力的目标。Yates等发现CXCR7的表达在膀胱癌组织中增高，并且其增高的水平伴随着高级别的肿瘤及肿瘤转移。此外，CXCR7已被证实通过多种途径与膀胱癌的增殖、迁移、侵袭有关，其中包括ERK，Stag与AKT等信号通路．。本研究目的为验证miR．430靶向作用于CXCR7，并进一步阐述这种靶向作用对膀胱癌细胞的影响及对其作用机制进行初步的研究。方法：1、采用Real-timePCR检测miR一430在正常膀胱组织、癌旁组织博七学位论文中文摘要及不同分期的膀胱癌组织中的表达情况。采用双荧光素

6、酶报告系统验证miR-430与CXCR7之间的靶向调控关系。2、构建miR-430过表达慢病毒载体和CXCR7过表达真核质粒载体。3、采用MTT法、流式细胞检测法、TransWell法等常用方法对miR一430过表达慢病毒感染和CXCR7过表达质粒转染的人膀胱癌5637细胞进行实验，从细胞生长、细胞周期、侵袭能力、克隆形成的方面来检测miR．430靶向调控CXCR7对膀胱癌生物学行为的影响。4、用Western．Blot方法来检测转染了miR一430过表达慢病毒和CXCR7过表达质粒的膀胱癌5637细胞中ERK、

7、p-ERK、MMP一2、MMP．9的表达情况，来初步探寻其对膀胱癌细胞生物学影响的机制。结果：1、miR-430在膀胱癌组织中表达较正常组织组和癌旁组织组降低，且在膀胱癌组织中随病理分期的增加而降低明显。通过双荧光素酶报告基因系统验证了miR．430与CXCR7之间存在靶向调控关系，miR-430能够降低CXCR7在膀胱癌细胞中的表达。2．成功建立了miR．430过表达慢病毒载体及CXCR7过表达真核质粒载体。3、在人膀胱癌5637细胞株中使mir-430的强制过表达明显抑制细胞增殖，迁移侵袭和克隆形成的能力，与

8、CXCR7强制过表达的结果截然相反。博十学位论文中文摘要4，在人膀胱癌5637细胞株中miR-430的过表达能抑制ERK、p-ERK、MMP一2、MMP一9的表达，而上调TFAM表达却促进ERK、P—ERK、MMP一2、MMP一9的表达。结论：本研究首先发现在正常膀胱、癌旁组织和膀胱癌组织中的mir-430的异常表达。此外，在人膀胱癌5637细胞株中使mir．430的强制