1,25-(oh)2d3对哮喘小鼠肺内tim-4表达的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectof1，25一(OH)2D3ontheexpressionofTIM-4●^●inlungofasthmatlCmiceByYa—ZheWangSupervisor：Prof．BinLuanPaediatricsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包

2、含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：Fill：zof弓年6月f日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或

3、成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：hB年‘月f日摘要1，25．(oH)2D3对哮喘小鼠肺内TIM．4表达的影响硕士研究生：王亚哲导师：栾斌专业：儿科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要支气管哮喘是儿童时期呼吸系统常见的疾病之一，以气道慢性炎症、气道高反应性和气道结构的重塑为基本病理特征，其发病机制复杂，主要考虑和机体自身免疫反应异常应答相关，但目前尚未完全阐明。支气管哮喘的发病机制主要集中于1111胁2细胞分化失衡后引起的一系列异常免疫应答。Thl、Th2细胞的分化方向及分泌功能己逐步被人了解，但其刺激分化的分子机

4、制尚未完全清楚。T细胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(Tcellimmunoglobulinmucinprotein，TIM)基因家族是新近发现的哮喘易感基因家族成员，因其转录蛋白最早被发现表达，于T淋巴细胞表面，故而得此名。研究表明，TIM蛋白具有双向调节T细胞分化的作用。TIM．4仅表达于抗原提呈细胞表面，如树突状细胞、巨噬细胞等，包括四个区段。研究证实其与免疫性疾病如肿瘤免疫耐受、肾脏缺血再灌注损伤及支气管哮喘等有密切关系，但对其发挥生物学效应的具体机制尚未完全明确。1，25．(OH)2D3是维生素D3的活性代谢产物，除骨钙调节作用外，还调节着机体自身免疫反应。其免疫调节作用

5、亦主要通过改变树突状细胞及单核细胞的活性来实现。目前关于l，25．(OH)2D3对哮喘患儿的保护作用，在流行病学调查及临床实践中，已得到证实，但其明确的机制原理，尚未明确。本研究通过建立哮喘小鼠气道重塑模型，使用1，25．(OH)2D3腹腔注射进行干预治疗，观察哮喘小鼠气道重塑改善情况及TIM．4蛋白及mRNA表达改变，从而更深入挖掘哮喘的发病机制，为哮喘的治疗寻找新的靶点。摘要目的在哮喘小鼠气道重塑模型上，使用l，25．(OH)2D3腹腔注射，进行干预治疗，测量治疗后哮喘小鼠气道壁厚度，与哮喘组比较是否有所好转；测定肺组织内TIM．4表达量的改变。旨在从新的角度分析哮喘发病

6、机制，为哮喘的治疗开辟道路。II摘要材料和方法1实验动物分组及哮喘模型制备30只雌性、健康、8周龄的BALB／c系小鼠，适应性饲养l周后，按照随机原则将小鼠分为对照组、哮喘组和1，25．(OH)203干预组，每组10只，制备动物模型。模型致敏阶段：哮喘组及1，25．(OH)203干预组小鼠在实验的第1、8、15天分别给予腹腔注射抗原混合液O．2mL(含OVA50“g、10％氢氧化铝O．15mL和生理盐水0．05mL)，对照组则给予0．2mL生理盐水代替。模型激发阶段：哮喘组及1，25．(OH)2D3干预组小鼠分别于实验的第22天在自制玻璃容器中给予雾化吸入1％OVA溶液(5m

7、L)进行激发，1次／天，30miIl／次，持续雾化14次，至实验第35天结束，对照组以生理盐水取代OVA雾化吸入。模型干预治疗：1，25．(oH)2D3干预组于雾化激发前30min给予腹腔注射l，25．(OH)2D3混合液0．1mL(含l，25．(OH)2D3O．1ug、无水乙醇2．5此、生理盐水O．1mL)，哮喘组及对照组小鼠均以等剂量生理盐水替代1，25．(OH)2D3混合液。2肺组织标本的制备末次雾化结束后24小时内，采用乙醚吸入麻醉各组小鼠，将小鼠固定于操作台上，开胸，暴露小鼠肺组织及心脏，结扎