谷氨酸载体eaat1在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

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1、上海医科大学博士学位论文谷氨酸载体EAAT1在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用姓名：陶锋申请学位级别：博士专业：神经生物学指导教师：孙凤艳2000.5.11．中文摘要答氨酸载体EAATl在毅生丈鼠缺氧缺盔性脑损伤中豹作愚I谷氨酸燕中枢神经系统中一种主要的兴奋槛神经递质，它在突触可凝性和神经系统发育过程中起重要作用。然而，在脑缺血等病理奈停下，谷氨酸欠量释放至突触间隙中，使谷氨酸受体过度兴奋而产生兴奋蓐作用。大量研究表明：谷氨酸的神经毒效应是脑缺血后彝缀元死亡姆主要原霉之一，屯参与在新生丸缺氧缺血蛙弦损伤的

2、病理生理过程中。谷氨酸§宅神经来稿释放戆谷氨酸在突舷阏凉表不是逯过酶解失活，而是通过重摄取的机制被再利用。参与此熏摄取的载体目前被认为是存在于绅经死和神经胶康缎飕壤土镌高囊寿力镝依籁烃谷氨酸载体(下称“谷氨酸载体”)，该载体对细胞外谷氨酸浓度的有效谲节楚维持生理装态下谷氯酸毖秘经传递的必要条锋。蓟餮嚣为止，编码藏种不闲谷氨酸载体妲型(EAATl-5)的cDNA已被克隆，并已异清了英相应缒氨基酸序列。与其它亚型相比，EAATl由于其摄取谷氨酸的吃饿较高，被认为可能在一些病理状态下(如：缺氧缺血)起主要诈用。

3、我们实验室已经在成年大鼠局灶性光化掌脑缺赢模型上观察割：缺血半暗区内谷氨酸裁钵GLAST(EAATI)mRNA表达在缺血后72小时明显增加；谷氯酸摄取抑制荆L-trans-PDC呈剂量依赖性增加缺血麝的脑梗塞体积。土述结果提示：麒缺血詹EAATl表达增加可能有利于限制细胞外谷氨酸水平的有害升高，从而减轻脑损伤的程度。)为了进一步明确EAATl在缺氧缺血性脑损伤中的作用，本课题在新巍大鼠缺氧缺血性脑损伤模燃上，采用形态学观察和药理学分析等手段，研究了缺氧缺焱对EAATlmRNA及其簧自在新生大鼠脑内表速的影

4、响，缺氧缺血后EAATl表达与神经元DNA损伤之闻的关系，以及缺氧缺血后EAATI表达改变的功能意义。／f1．i新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的特点本研究采用的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型引起一种不完全性可逆的轻度前脑缺血。神经无损伤仅出现予颈总动脉结抽同侧半球，硒对侧半球未受累及。损伤主要分布在结扎侧大脑中动脉的供血区，按损伤程度和损伤逸出现的凡率降次辩梦}l为：欠脑皮层>纹状体>海马>丘脑。损伤主要表现为神经元定性、凋亡或坏死，神经冗丢失伴胶质细胞增童，严霞者可见囊状或空腔梗塞甄．缺氯缺血厝损伤区神经元呈T

5、UNEL染色阳性。该模型的三种对照组(单纯缺叔、单纯缺氧和缀手术经)均未霓狰经无簇伤，镜下示鼹镯蕊组织结构对称、细胞排列规则并具正常形态特征。透过骚簇伤评分，我钠跷察萋《缺氧缺血后罅经无损伤程度有一时间依赖性爱化过程：缺氟缺血后24小时出现明显的神经冗丢失，缺氧缺血君48，j、对掉经元攘伤避一步加重，薅殃氧抉血后72小时则表现为损伤减轻。缺氧缺血后24小时、48小时和72小时的脑损揍分数分刹为：17．4±2。9(珏一21)、24。3土4．1(雅=15)表5。3±3．2(n=9)。与缺氧缺成后72小时相比，

6、缺氧缺妇后24小时和48小时具较浅辑黯援饬分数(P<0。05)，其中缺氧姣血后48，{、对该分数值最高。该结果提示：新擞大鼠缺氧缺血后可能激活了体内的一糖代偿机制，从而使葵耪经元损饬得以减轻。1。2缺氧缺血改变了新生火鼠脑内EAATl的袁述原位杂交组织化学染色显示：在假手术级(n=6)，仅靖少量EAATImRNA表这在大脑皮层第V层(1347．6士36．7OD／1_73619平方微米)。缺氧缺血后EAATlmRNA在颈总动脉结扎同侧大脑皮层上的表逸明显较其它脑区多、且吴时阍依赖性。缺氧缺血后12小时、24

7、小时、48小时和72小时的结扎侧大脑皮屡EAATlmR姒表达量(OD／173619平方微米)分剐为：1682．2±55．0(nm5)、3071．0±198．1(n。4)、2409．8±38．6(nm5)和1437．1±75．4(nz《)。统计分辑表翳：缺氧镰血后12小时、24，j、时和48小时的表这量较假手术组多(P<0．05)，其中缺氧缺血屉24小时达高峰，而缺氧缺血后72小霉孛馥表达辩恢复到锻手术纽水平(P>0．05)。免疫组织化学染色显示：在假手术组(nm6)，仅在大脑皮层有少蚤EAATl蛋白表这(

8、缀3±i。7个鼯经细胞／锻手术谰半球)。与EAATlmRNA的表达相似，缺氧缺血后EAATl蛋白在结扎侧大脑皮层土壤表这也终曼较其它艨墨多、盈翼对簿农籁柽。缺氧缺焱后i2小时、24小时、48小时和72小时的结扎侧大脑皮层EAATl免渡阳牲细A包数分署《为：30．7±l。5翻=3)、221．1±39．5《盎*7)、297．6±29．3(n=7)和44．7±4．9(n；6)。统计分析表明：缺氧歃焱后24，l、时争48小对的EAAT