细胞内il-1α调控沙眼衣原体诱导il-8产生机制研究

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1、万方数据中图分类号—R39—2．9UDC610硕士学位论文学校代码!Q§兰三密级．全珏细胞内IL．10【调控沙眼衣原体诱导IL．8产生机制研究StudyOiltheMechanismoftheIntracellularinterleukin一10cregulationoftheproductionoflL一8inducedbyChlamydiatrachomatis作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：论文答辩日期张宁洁基础医学免疫学基础医学院余平教授程文副教授乡缪：里兰：≥弓答辩委员会主席中南大学二O一四年五月能够一乞口万方

2、数据本研究受到国家自然科学基金项目(编号：81071403)资助_llIIⅢ㈣IIIllllllqqlllklqqlllllllllY2688196万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另UDi：i以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：型学位论文版权

3、使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：弓长守；乏导师签名日期：盔华年上月粤日万方数据硕士学位论文中文摘要细胞内IL．1成调控沙眼衣原体诱导IL．8产生机制研究摘要：沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，Ct)是重要的性传播疾病病原体，Ct感染可引起宫颈炎、输

4、卵管炎和盆腔炎，并导致流产、异位妊娠、不孕等严重后遗症。Ct感染可刺激上皮细胞产生大量炎性细胞因子，参与调节宿主的防御作用。促炎细胞因子IL．10c是机体抵抗感染的重要炎性介质，其可诱导自身(IL．10【)、IL一6和IL一8等炎症因子的产生。目的：探讨细胞内IL．10【在沙眼衣原体早期诱导IL-8产生中的重要作用；Hax．1蛋白与IL．1Oc相互作用调控沙眼衣原体感染诱导IL一8产生，探讨Ct感染时细胞内IL一10【参与IL一8产生调控的分子机制。方法：1．ELISA、细胞免疫荧光检测沙眼衣原体感染诱导的炎症因子的产生和定位，复苏已建立的单克隆稳定细胞系

5、，ELISA方法筛选出内源性IL．10【沉默效果最佳的HeLa229稳定细胞系。2．构建pro—IL．10【全长质粒并转染稳定细胞系，ELISA检测外源性IL．10【对沙眼衣原体诱导促炎性细胞因子IL．8产生的影响。3．Westernblot和细胞免疫荧光检测Ct感染后Hax．1在HeLa229细胞中的表达及亚细胞定位细胞，免疫荧光检测Ct感染后Hax．1和IL．1O【的共定位；4．利用siRNA技术下调HeLa229细胞Hax．1的表达，ELISA检测Hax．1沉默对Ct感染后IL一8产生的影响。结果：1．Ct感染HeLa229细胞后44h可产生炎症细胞

6、因子IL．1O【和IL．8，其中IL．10【主要表达于细胞内，IL．8则主要分泌于细胞外。II万方数据硕士学位论文中文摘要2．细胞免疫荧光检测到Ct感染后IL．10【入核，同时伴有IL．8的产生。3．筛选出内源性IL．1Cc沉默效果最佳的HeLa229稳定细胞株$2C2，沉默效率约79％，Ct感染后44h，与空质粒载体转染细胞相比，$2C2稳定细胞培养上清IL一8的表达显著降低。4．将pro—IL．10【基因全长质粒转染$2C2稳定细胞株，ELISA检测结果证实$2C2细胞可以表达外源性pro．IL一1a，Ct感染$2C2细胞后外源性IL．1Q诱导促炎因子

7、IL一8的表达。5．Westernblot实验证明Ct感染HeLa229细胞48h，Hax．1表达显著增高。6．免疫荧光实验证明Ct刺激44h时IL一1。c、Hax．1有共入核现象，利用siRNA技术沉默Hax．1基因的表达对Ct感染诱导的IL一8产生无影响。结论：1．Ct’感染早期诱导的IL一8的产生依赖于细胞内IL．10【。2．Ct感染可上调Hax．1的表达，并引起IL一10c和Hax一1蛋白的共入核。3．Hax．1基因沉默不影响IL一1仪诱导IL一8的产生。图l8幅，表1个，参考文献78篇关键词：沙眼衣原体；IL．1仅；Hax．1；IL．8分类号：R

8、392．9万方数据硕士学位论文英文摘要StudyontheMech