斑马鱼胚胎细胞体外分化产生黑色素样细胞的研究

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1、万方数据分类号学校代码1Q墨生2密级学号201202141159斑马鱼胚胎细胞体外分化产生黑色素样细胞的研究StudyontheMelanocyte—·likeCellDifferentiatedfromZebrafishEmbryonicCellZ咒vZ护D指导教师姓名、职称直垩鲎丝筮湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月万方数据摘要色素细胞为动物提供了华丽斑斓的外表，不仅帮助动物适应生存环境，而且在动物种群内以及物种之间相互作用上有重要作用，也是进化选择的因素之一。黑色素细胞是动物体色素细胞的主要类型之一，内含大量黑色素颗粒，通过吸收特定波长的入射光而

2、呈现黑色。开展黑色素细胞生物学研究有助于进一步解析体色多样性的分子机制、探索体色失常以及黑色素细胞瘤的发育机理。在斑马鱼胚胎细胞的体外培养和建系的研究中，我们发现在含有鱼血清的培养体系中，能够诱导分化出黑色素样细胞。在此基础上，开展了斑马鱼胚胎细胞体外分化产生黑色素样细胞的研究。相关研究内容与结果总结如下：(1)以受精后10小时的斑马鱼胚胎(10hpf，神经胚早期)为材料，进行胚胎细胞的分离和体外培养，获得了斑马鱼体外培养的胚胎细胞；(2)摸索了生长因子、斑马鱼胚胎提取液、鱼血清等不同培养条件对斑马鱼胚胎细胞体外培养的影响，发现鱼血清体外培养条件下，可以诱导斑马鱼

3、胚胎细胞分化出黑色素样细胞；(3)对添加鱼血清后获得到的黑色素样细胞的形态及结构特征进行了显微观察。黑色素样细胞直径约20um’200um不等，细胞内含有大小不等的黑色素颗粒，细胞呈现黑色。根据形态的不同，黑色素样细胞可以分为圆球状、分枝状以及不规则等不同细胞类型；万方数据(4)结合RT—PCR技术，检测了黑色素干细胞标记基因mitfa和黑色素细胞标记基因妒在鱼血清培养体系细胞中的表达。检测结果显示在鱼血清培养体系细胞中的均检测到mit：8禾u妒的表达。表明，鱼血清培养条件下，胚胎细胞可以诱导分化产生黑色素干细胞和黑色素细胞；(5)为进一步了解和掌握鱼血清培养体系

4、中培养细胞的发育状况，利用免疫荧光方法检测了Nestin、Brachyury和Gata4等几种多能性标记因子的表达。结果显示，在培养细胞中检测到Nestin、Brachyury和Gata4阳性表达的细胞，表明鱼血清培养条件下，有黑色素细胞诱导分化的同时，培养体系中仍然有外胚层细胞、中胚层细胞和内胚层细胞等多能性干细胞的存在。综上所述，本研究以体外培养的斑马鱼胚胎细胞为材料，确定了在鱼血清培养条件下能够诱导分化产生黑色素细胞，为进一步建立黑色素干细胞和黑色素细胞分子发育调控机理研究的细胞模型奠定了重要的研究基础。关键词：斑马鱼，胚胎细胞，体外培养，黑色素细胞II万方

5、数据ABSTRACTPigmentcellprovidesainimalswithgorgeousandattractiveappearances．Itnotonlyhelpsanimalssuittotheenvironment，butalsoplaysanimportantroleintheinteractionsbetweenspeciesandinter-species．It’Soneofthefactorsinnaturalselectionandevolution．Melanocyteisoneofthemaincategoriesofanimalpi

6、gmentcells，Itcontainsagreatmanyofmelaningranules，whichappearblackbyabsorbingandreflectingcertainwavelengthsofincidentlight．Conductingthecellbiologicalstudiesofmelanocyteswillcontributetothefurtheranalysisofthebodycolorpattems’morphologicaldiversity,themalpigmemationexplorationandthede

7、velopmentmechanismsofmelanoma．Intheexperimentalculturingandresearchofzebrafishembryoniccells／nvitro，wehavefoundthatthezebrafishembryoniccellsCanbeinducedbytheculturesystemcontainingfishserumtodifferentiatetomelanocyte—likecells．Accordingtothiscondition，wecarryoutresearchaboutthezebraf

8、ishem