脑膜瘤浸润淋巴细胞表型及特性的研究

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1、万方数据中图分类号基Z三窆：垒§UDC610博士学位论文学校代码!Q§塑密级公开脑膜瘤浸润淋巴细胞表型及特性的研究Phenotypeandcharacteristicsoftumor—infiltratinglymphocytesinmenlnglomas，--'一作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：方亮娟临床医学神经病学湘雅三医院宋治教授KevinO’ConnorAssistantProfessor论文答辩日期2Q!垒生§旦!鱼旦答辩委员会主席魍中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声

2、明lIIIHIlllllllllllilllliillllliillllil．1llmllw,Y2688782本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：立屯鹜坠日期：2竺!年』月业日学位论文版权使用授权书本

3、学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：日期：卫生年正月止导师签名万方数据脑膜瘤浸润B细胞表型及免疫球蛋白重链可变区序列多样性分析摘要：目的：脑膜瘤患者的肿瘤组织中普遍存在B淋巴细胞浸润，但是到目前为止，对于这些B细胞的表型特性及其在脑膜瘤中的可能作用机制

4、的研究有限。我们研究了来自22个脑膜瘤标本的肿瘤浸润B细胞(tumor-infiltratingBcells，TIL．Bs)的表型特征和免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)重链可变区(variableregionofheavychain，VH)的基因多态性，并分析了这些B细胞在脑膜瘤中的可能作用机制。方法：1．免疫组织化学方法初步检测脑膜瘤中是否存在B细胞浸润、B细胞分布特征和浸润程度。2．PCR扩增、质粒克隆和基因测序等分子生物学方法对294个TIL—Bs、34个正常外周血初始B细胞(naiveBcells)和

5、45个正常外周血效应／记忆B细胞(antigen—experiencedBcells)的IgVH基因进行测序，进而分析这些B细胞是否经历过特异性抗原刺激并活化等一系列过程。3．BASELINe运算法则检验TIL．BsIgVH基因的抗原选择强度。结果：1．脑膜瘤中存在数量不等的CD20+B细胞和CDl38+抗体分泌浆细胞的浸润，细胞散在分布于脑膜瘤实质中，没有明显的聚集趋势，脑膜瘤微环境中未发现有利于B细胞生长、分化的特定区域。2．B细胞的浸润程度与脑膜瘤WHO等级之间不存在相关性。3．与人类B细胞IgVH等位基因(germ．

6、1inegene)相比较，每个TIL—Bs的IgvH约400个核苷酸中，平均存在19个核苷酸突变(nucleotidemutation)，平均导致11个氨基酸替代(aminoacidreplacement)；在阳性对照组中，外周血效应lie忆B细胞的平均核苷酸突变数为15，平均氨基酸突变数为9；与之相反，在阴性对照组中，外周血初始B细胞几乎没有核苷酸突变(平均突变数目<1)。4．我们对22个脑膜瘤标本的294个TIL．Bs的IgVH进行基因测序，其中46％的TIL．Bs属于克隆(clones)的成员，剩下的54％互不关联；每

7、个脑膜瘤平均克隆数为3，平均每个克隆内包括6个B细胞，其中5个属于克隆变异的B细胞(variants)。正常人外周血中的效应／-i,B忆B细胞和初始B细胞均未发现克隆现象。5．72％的TIL．Bs从kM+转换到IgG+，67％的外周血效应／记忆B细胞从IgM+转换到IgG+，提示TIL．Bs同外周血效应／-i,己忆B细胞一样，也经历过抗原选择过程。6．抗原选择强度II万方数据检测提示在IgVH框架区(frameworkregion，FR)存在阴性选择，而在互补决定区(complementaritydeterminingreg

8、ion，CDR)存在阳性选择。结论：脑膜瘤微环境中均匀分布着数量不等的B淋巴细胞，这些B细胞中的绝大部分经历了同型转换(从IgM+至IJIgG+)、核苷酸超变和氨基酸替代、克隆扩增和克隆内变异的过程，提示这些B细胞是经肿瘤相关性抗原刺激后选择性表达的特异性效应／记忆B细胞。图11幅，表4个