胃癌dna异常甲基化影响cxc型趋化因子cxcl14表达水平的研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题El：宦疸塑坚显堂里基化彪喧gXg型趋丝国王gXgL!垒麦达丞王数硒宣答辩委员会主席：答辩委员会成员：张启瑜叶再元施红旗论文答辩日期：2014．05．28万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29附致口汞·················································································3l谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43学位论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43万方数据温州医科大学硕士学位

3、论文胃癌DNA异常甲基化影响CXC型趋化因子CXCLl4表达水平的研究中文摘要背景：胃癌作为我国第二大恶性肿瘤，总体5年生存率不到20％，缺乏特异性早期诊断方式和有效治疗方法是目前的研究短板。CXCLl4(C．X．Cmotifchemokineligand14)，作为趋化因子CXC子家族中新的一员，近年来发现在人体大部分组织中普遍表达。而在不同的人体恶性实体肿瘤中CXCLl4的表达情况高低不一。但在胃恶性肿瘤中CXCLl4的表达水平和临床意义未见报道。目的：检测胃癌组织和配对正常胃粘膜组织中CXCLl4的表达情况，探讨表达差异的形成原因，并联系临床病理分型，

4、寻找在临床上的应用意义。方法：利用实时荧光定量PCR(Realtime．PCR)的方法检测60例肿瘤／正常配对样本中CXCLl4信使RNA水平的表达差异。蛋白印迹法(WesternBlot)验证多克隆抗原特异性后，免疫组织化学染色方法(Immunohistochemistry)检测30例肿瘤／正常配对样本中CXCLl4蛋白水平的表达差异。CXCLl4DNA启动子区域甲基化水平采用重亚硫酸盐测序法(bisulfitesequencingPCR)验证。将胃癌细胞株AGS、SCG7901、BGC823和MGC803在去甲基化药物地西他滨(5-Aza．2’．deox

5、ycytidine)不同浓度梯度处理后，采用Realtime．PCR检测CXCLl4信使RNA表达恢复情况。最后联系临床病理分型和生存分析，利用卡方检验、Student、ST检验、Kruskal．WallisH检验、Kaplan．Meier生存曲线、Cox回归方程等统计方法探讨CXCLl4的临床意义。结果：相对于配对胃正常粘膜组织，CXCLl4信使RNA在胃癌组织中的相对表达量为0．569，两者差异有统计学意义(尸<0．001)。在配对胃正常粘膜组织中CXCLl4蛋白半定量表达水平约为90％以上，而肿瘤组织中蛋白水平降为60％左右，两者差异存在统计学意义(P

6、

7、=-O．498)。再将甲基化位点逐一分析，发现第2、6、7、8、9号甲基化位点在正常组织中甲基化率为0，而肿瘤组织中高达40．67％，差异存在统计学意义(尸<0．001)。转向细胞实验，当地西他滨处理胃癌细胞株AGS、SCG7901、BGC823和MGC803五天后，AGS、SCG7901和BGC823中CXCLl4信使RNA的表达量得到提高(P<0．001)。但在不同的药物浓度之间，表达恢复情况未见统计学差异(尸>0．05)。AGS细胞DNA甲基化测序分析示在去甲基药物处理后，CXCLl4启动子区域甲基化率从用药前的85．62％下降到12．55％(尸<0．

8、001)，但在药物浓度梯度之间甲基化水平改变仍未见明