绵马素pb体外抗hepg2肝癌细胞的作用机制研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14677DissertationfortheDegreeofMaster／nvitroStudyonantitumormechanismofaspidinPBtowardshumanhepatocarcinomaHepG2cellsCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0ralExamination：University：SunYaoProf．FuYuiieMasterPharmacognosyJune，2014Nort

2、heastForestry万方数据摘要肿瘤的发生和发展与许多信号通路息息相关，因此靶向作用于特定的信号转导分子，从而预防和治疗肿瘤的研究策略日益受到越来越多的关注。在下游生存信号中，P13K／Akt通路具有十分重要的作用，因此更深入的研究这一通路将会促进开发新颖的肿瘤治疗药物。绵马素PB(aspidinPB)是从香鳞毛蕨Dryopterisfragrans(L．)Schott中分离的一种间苯三酚类化合物，文献报道具有一定的抗肿瘤活性，然而其诱导肿瘤细胞凋亡的机制至今未有深入报道。本文以绵马素PB为研究对象，对其体外抗肿瘤活性和诱导凋亡的机制进行研究，发现绵马素PB通过调节P13K／A

3、kVGSK-313信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡。研究结果如下：1．绵马素PB对多种肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制作用。其中对HepG2细胞的抑制作用最强，IC50值是10．59+0．67IIM，进一步检测结果表明，绵马素PB对HepG2细胞的增殖抑制作用是呈时间和浓度依赖的。然而，正常的小鼠单核巨噬细胞Raw264．7和小鼠胚胎成骨细胞MC3T3．E1的IC50值分别是42．50-士0．54¨M和38．19+0．92uM，远远大于HepG2细胞，说明绵马素PB对正常细胞株的毒性较小。另外，使用激光共聚焦显微镜从形态学角度观察绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后的变化，可以看

4、出其细胞染色质凝集并固缩，细胞核膜核仁碎裂成小片段形成凋亡小体。2．绵马素PB能够诱导HepG2细胞发生凋亡。首先，使用罗丹明123染色法检测绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后线粒体跨膜电位的变化，结果呈现明显地下降趋势。其次，采用琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带(DNALadder)的产生，可以看出加入绵马素PB后的HepG2细胞的泳道内均有明显的DNALadder出现。最后，利用A蛐exinv-FITC／PI双染试剂盒检测细胞凋亡百分率，结果显示绵马素PB作用于HepG2细胞48h后，细胞的凋亡百分率显著升高，并且呈浓度依赖的方式。3．绵马素PB通过调节P13K／Akt／GSK．3

5、p信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡。(1)绵马素PB可以抑制P13K的表达，抑制Ser473Akt的磷酸化，抑制Ser9GSK-31B的表达，随后上调NAG．1的表达。相似地，加入P13K抑制剂渥曼青霉素后，各蛋白的表达效果和绵马素PB作用一致。该结果说明P13K／AkVGSK．3D信号通路可能是绵马素PB作用于HepG2肝癌细胞的主要分子机制之一。(2)绵马素PB诱发了caspase．3的激活和PARP的裂解。用广谱caspase抑制剂Z．VAD．FMK预处理HepG2细胞2h后，可明显地抑制二者的变化。这说明绵马素PB诱导的HepG2细胞凋亡是通过caspase所依赖的途径

6、。综上所述，绵马素PB在不影响正常细胞生长的状况下，可以有效地抑制HepG2肝万方数据摘要癌细胞的增殖，这种增殖抑制作用与其诱导的细胞凋亡密切相关。绵马素PB通过caspase所依赖的途径诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其中P13K／Akt／GSK-3[3／NAG一1信号通路可能作为最主要的分子机制之一。上述研究结果将对绵马素PB进一步的研究并开发为新药提供良好的理论基础。关键词绵马素PB；HepG2细胞；凋亡；P13K／Akt／GSK一3p万方数据AbstractManycancer-relatedsignalingpathwayshavebeenelucidatedandther

7、eareconsiderableeffortstodevelopnewtreatmentstrategies，whichtargetspecificsignaltransductionmolecules．Amongthedownstreamsurvivalsignals，P13K／Aktpathwayplaysacrucialrole．Thus，abetterunderstandingofthispathwaymayfacilitatetodevelopn