枯草芽孢杆菌s-16抑制核盘菌形成活性物质的鉴定及其相关功能基因的克隆

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕

2、业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：盎～摘要向日葵菌核病是由核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum(Lib)deBary．)侵染所引起的一种向日葵毁灭性病害。目前，抗病品种选育、农业防治、化学防治等对该病害均无有效防治效果。因此本课题组从生物防治着手，对向日葵菌核病的防治

3、进行了系列的研究。以课题组已分离得到的，对核盘菌(Ssclerotiorum)有显著抑菌效果的枯草芽孢杆菌S．16为材料，对其抗茵活性物质的理化性质、气体抑菌物质的组分、不同的培养条件对核盘菌生长影响等进行研究；并利用质粒pHVl249(包含mini．TnlO)进行电击转化，构建突变子库；同时对突变子的生物膜的形成能力进行了研究。目的是找到抑菌物质产生的相关基因，为枯草芽孢杆菌工程菌的改造提供一定的理论依据。具体研究结果如下：1．构建了3000个突变子库，并从中筛选到了3株丧失抑菌能力的突变子；同时也筛选到l株丧失产生气体抑菌物质的突变子；从随机挑选的200株突变菌株中

4、找到6株丧失形成生物能力的菌株。2．抗菌活性物质理化性质的研究。40mL(100mL三角瓶)的装液量，分别以葡萄糖和牛肉浸膏为碳、氮源时最有利于抑菌物质的产生，同时S一16的抑菌粗提物的抑菌活性最高；抑菌物质的热稳定性较高，对蛋白酶较为稳定，较耐酸不耐碱，紫外照射处理对于抑菌活性的影响不明显。根据以上结论，初步推断枯草芽抱杆菌S．16的抑菌物质的主要成分为脂肽类物质。3．探究气体抑菌物质的组分。(1)1．Butanamine，N．methyl一(N—E}={基『F丁胺)、2一Hexynoicacid(乙炔酸)、3-Butenamide(正丁胺)、Cyclobutanol

5、(环丁醇)、2-Octanamine(正辛胺)和Benzothiazole，2一methyl一(2一甲基苯并噻唑)能够完全抑制核盘菌菌丝的生长。(2)Formamide，N．ethyl．N．phenyl一(N，N一二甲基甲酰胺)、Piperazine，2-methyl一(2一甲基丙酰胺)影响菌丝正常生长，造成菌丝黄化，但是并不影响菌核形成。(3)Ethyne，fluoro一(十二烷基甲铵)和3，3一Dimethyl一4一methylamino-butan一2一one(3，3一二甲基一4一甲氨基r酮)，对核盘菌菌丝和菌核影响较小，只是造成菌丝稀疏，但是不会影响菌核的形成。

6、实验结果表明，抑菌气体中含有多个可以抑制核盘菌菌丝和菌核形成的成分。4．不同培养条件对核盘菌生长的影响。核盘菌gt长最适的培养基是PSA，最适的碳源、氮源分别为蔗糖和硝酸铵，在以碳酸铵为氮源培养的核盘菌，菌丝，li长情况较差，其培养条件卜．的核盘菌并不产生菌核原基和菌核。核盘菌的生长情况随着培养基体积和含糖量的增多。偏酸‘陛条件下较有利jj-核篇‘菌茼丝的生长及荫核的J^二￡E，其中，pH6为最适宜核盘菌，上长的pH。关键词：枯草芽孢打简S一16；抑蔺物质；mini—Tnl0：突变子；7卜物膜CloningoftheBacteriostatRelatedGeneandI

7、dentificationofAntifungalSubstancesfromBacillussubtilisSm16AbstractSunflowersclerotiniaisadevastatingdiseaseinfectedbySclerotiniasclerotiorum，atpresent，thereisnoeffectivepreventionandcontrolmeasures．Chemicalcontrol、agriculturalcontrolandmultiresistancevarietyselectivebree