功能显像与靶区勾画

《功能显像与靶区勾画》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、血清蛋白质组学技术筛选NSCLC放化疗敏感性标志物山东省肿瘤医院放疗科黄伟丁秀平李宝生第一部分放化疗敏感性血清标志蛋白的筛选蛋白质组学与预测标记物放化疗敏感性的变化不是某一个蛋白发生变化所致，而是组织或细胞内大量蛋白质所形成的复杂网络变化所致，是各因素相互作用引起的。蛋白质组学(proteomics)是从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律，实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析。1.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱2.电喷雾电离串联质谱3.表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱其原理是先进行等电聚焦，蛋白质沿PH梯度分离，到

2、达各自的等电点，随后按分子量把复杂的蛋白质成分分离巨量生物信息资源的收集、存储、处理、共享、研究和开发。由数据库、计算机网络和应用软件3大部分组成蛋白组学技术流程双向凝胶电泳(2-DE)质谱技术(MS)生物信息技术质谱技术①基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）：利用基质吸收激光的能量使固相的多肽样品离子化，获得蛋白质的肤质量指纹图（PMF），然后通过相应的数据库搜索，鉴定蛋白质；②电喷雾质谱（ESI-MS）：在喷射过程中以连续离子化方式使多样品电离；③表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）:蛋

3、白芯片技术。④串联质谱（MS/MS）：用于肤段的氨基酸测序；液相色谱-质谱联用（LCMS/MS）LC-MS/MS联用的优点因为气相色谱只能分离易挥发且不分解的物质，而液相色谱则把分离范围大大拓宽了，生物大分子也能分离，LC与高选择性、高灵敏度的MS/MS结合，可对复杂样品进行实时分析LC-MS/MS没有偏向性，自动化程度高、可重复性好，为发现新的与疾病相关的血清蛋白标记物奠定了基础。患者资料16例患者放疗期间给予同步含顺铂双药方案化疗2周期16例肺癌（腺癌或鳞癌）病人放化疗前的血清RECIST评价疗效，分为治疗敏感组和抗拒组，各8例患者，根据病理

4、类型、年龄、性别、化疗方案进行一一配对*放疗：40Gy后复位行后程加速超分割，1.4Gy，bid，至总量59.6-73.6Gy*化疗：含铂类两药联合同步化疗2周期患者详细临床资料蛋白处理血清收集去除高丰度蛋白（AurumSerumProteinKit）蛋白提取蛋白定量（Bradford法）2-DE用IPGphorIEFSystem进行一相等电聚焦将聚焦后的胶条在SDS平衡液中平衡两次取出胶条在PROTENIIxiCell上进行垂直SDS-PAGE第二相分离分别取两个实验组混合血清各350μl进行电泳，每组实验重复3次。银染色方法凝胶图象分析用Um

5、axPowerLook1100透射扫描仪扫描凝胶，Imagemaster图像分析软件包对扫描图谱依次进行点检测、背景消减，建立平均凝胶，匹配、量化获取斑点的相关信息等分析用两组血清蛋白质点数最多的敏感组胶图为参考胶，对六幅胶图进行虚拟重建，再利Imagemaster软件将两张胶图中的斑点进行匹配，匹配不上的斑点视为差异点，选取表达量差异2倍以上的点作为后续质谱分析的候选蛋白质点质谱鉴定考染→胶内酶解法酶解蛋白nanoACQUITYUPLC超高效液相色谱键合乙烷杂颗粒柱为分析柱SynaptHighDefinitionMassSpectrometry

6、质谱仪（Waters公司）进行质谱分析SWISS-PROT蛋白质数据库液相色谱-质谱（LC-MS）仪nanoACQUITYUPLC超高效液相色谱系统配备自动进样器SynaptHighDefinitionMassSpectrometry质谱仪结果1.高丰度蛋白的去除效果图1.未去除高丰度蛋白的血清2-DE图谱图2.去除高丰度蛋白后的血清2-DE图谱结果2.2-DE图谱及图象分析结果3.差异蛋白质斑点的鉴定差异点为78个，根据3次2-DE结果，软件自动结合人工方式选取共同的蛋白质差异点8个进行质谱分析，其中在抗拒组上调的7个，抗拒组下调的1个结果4.

7、血清蛋白质鉴定结果结果5.鉴定蛋白质的功能分类细胞凋亡POTEETXLNGAPOA1、A1ATTMC5B、GFAP转录和翻译细胞结构蛋白代谢ApoA-I载脂蛋白A1（ApoA-I）是高密度脂蛋白(High-densitylipoprotein，HDL)的主要结构蛋白，是一种急性时相反应蛋白2004年Zhang等报道前列腺癌患者血清载脂蛋白A-I浓度较正常对照者显著降低程志强还报道骨转移的前列腺癌患者血清中ApoA-I的表达率显著低于无骨转移的患者2008年刘桂芝等报道ApoA-I在人Ⅰ期肺癌组织及正常癌旁组织中具有差异表达。α1-AT血清α1-抗

8、胰蛋白酶（α1-AT）,肝内和肝外合成，急性相蛋白，α1-AT浓度在炎症，感染，肿瘤，肝病时均显著增加研究发现多种恶性肿瘤细胞可以合成α