薄层色谱分析步骤及注意事项

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1、薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thinlayerchromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。⑴制板在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cmx20cm>5cmx20cm>20cmx20cm等。称取适量硅胶，加入0.2%〜0.5

2、%竣甲基纤维素钠溶液(CMC-Na),充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cmx20cm的玻璃板，3〜5g硅胶/块；硅胶与竣甲基纤维素钠的比例一般为1：2〜1：4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在空气中自然干燥后，置110°C烘箱中烘0.5〜lh,取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。⑵点样用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样

3、，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm,不宜超过5mm.底线距基线1〜2.5cm,点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm,为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1〜2cm,再进行点样。⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽屮，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取岀薄层板，样品组分因移动速度不同而彼此分离。①展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂屮，密封室顶的盖。①展开剂一般为两种以上互

4、溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。②薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。③展开应密闭，展距一般为8〜15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cim④展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。⑤展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。⑥Rf值一般控制在0.3〜0.8,当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。⑷斑点的检出展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色剂时，

5、显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。(-)有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。选择适当的展开剂是首要任务。一般常用溶剂按照极性从小到人的顺序排列大概为：石油醯v己烷v苯＜乙K＜THF＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇v甲醇。使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性

6、溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试。一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2〜0.8之间，定量测定在0.3〜0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇

7、、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、惦类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蔥酿、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和祜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。很多时候，展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油g^-EtOAc-HCOOH

8、（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂，如果有分开的迹象，再调整比例（或者加入第三种溶剂），达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，毗噪等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所