鸭瘟病毒ul17蛋白与ul25蛋白、ul26.5蛋白的细胞共定位研究

《鸭瘟病毒ul17蛋白与ul25蛋白、ul26.5蛋白的细胞共定位研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：≯／中年易月I砂日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留荠向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印

2、或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：导师签名砂f咋年易月／2日年月目万方数据中文摘要目前还未见DPVULl7基因功能研究的报道，本论文对DPV-CHv株的ULl7基因(由本实验室注册，GenBank登录号EF643567)进行了生物信息学分析，根据分析结果设计实验，对ULl7基因进行原核表达、多克隆抗体制各、转录表达时相分析及ULl7蛋白与UL25蛋白、UL26．5蛋白的细胞共定位研究，结果如下：1．DPV-ULl7基因的生物信息学分析生物信息学方法分析DPV-UL

3、l7基因，结果表明ULl7基因编码蛋白分子量为75．94298kDa，由684个氨基酸组成，无信号肽位点及跨膜区。同时该蛋白含19个磷酸化位点、4个糖基化位点和多个抗原表位，预测其主要定位在细胞核和细胞质。2．DPV-ULl7基因克隆表达、蛋白纯化和多克隆抗体制备根据DPVUL]7基因序列，用PrimerPremier5．0软件设计出一对特异性引物，并将扩增的ULl7全基因克隆入pMD20一T载体中，先后经XhoI和BamHI酶切后，克隆到原核表达质粒pET-32a(+)中，成功构建了pET32a-ULl7重组原核表达质粒。之后转化到BL21(DE3)表

4、达宿主菌，表达的重组蛋白大小约为96kDa。使用Ni-NTA琼脂糖凝胶过柱纯化，将纯化后的重组蛋白免疫BALB／C雄性小鼠和雄性家兔，制备鼠抗重组蛋白高免血清和兔抗重组蛋白高免血清，最高效价分别为1：4和1：32。3．DPVULl7基因转录和表达时相分析根据DPVULl7基因序列，在其内部设计了一对FQ．PCR的引物用于转录时相分析。药物抑制实验结果显示，uLl7基因为晚期基因。进一步用荧光定量PCR研究其转录时相，ULl7基因从12h开始转录，48h达到最大，72h开始急剧下降。通过WestemBlotting研究表达时相，最早于36h检测到ULl7蛋

5、白。综合三个实验的结果说明ULl7基因为晚期基因。4．DPVULl7基因编码蛋白亚细胞定位采用间接荧光免疫法检测ULl7蛋白在DPV感染的鸭胚成纤维细胞内的定位情况。结果显示，ULl7蛋白刚开始定位在细胞质，然后逐渐进入细胞核，同时随着表达量增大荧光亮度也在增大。说明uLl7蛋白定位在细胞质及细胞核。且无论在细胞核还是细胞质可见绿色荧光为颗粒状或点状。5．DPVULl7蛋白与UL25蛋白、L刀卫6．5蛋白亚细胞共定位研究采用双重间接荧光免疫法检测ULl7蛋白与UL25蛋白，ULl7蛋白与UL26．5蛋白在DPV感染的鸭胚成纤维细胞内是否共定位。结果显示，

6、ULl7蛋白与UL25蛋白共定位于细胞核和细胞质；ULl7蛋白与UL26．5蛋白也共定位于细胞核和细胞质。关键词：鸭瘟病毒；ULl7基因；原核表达；多克隆抗体制备；转录表达时相：亚细胞定位；共定位万方数据AbstractCo—localizationofULl7ProteinandUL25Protein．UL26．5ProteinfromDuckPlagueVirusinInfectedCellsWenTing(PreventiveVeterinaryMedicine)DirectedbyProf．ChengAnchunandProf．WangMings

7、huLittlestudiesonDPVULl7genehavebeenreported．ThisessayfocusedonthesequencecharacteristiCS．transcriptionandexpressiondynamicanalysis．subcellular10calizationofDPVULl7geneandULl7protein．Inaddition,Co—localizationofULl7proteinandUL25protein,UL26．5proteinbornduckplaguevirusCHVstrainin

8、infectedcells．Theresultsareasfollows：1．B