青岛文昌鱼早期发育相关基因amphimdp和brp-like的研究

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1、山东大学博士学位论文青岛文昌鱼早期发育相关基因AmphiMdp和brp-like的研究姓名：林浴霜申请学位级别：博士专业：发育生物学指导教师：张红卫20050101山东人学博I．学他论义原刽·陡声明本，久郑霞声}撰：掰呈交的学位论文，是本人在学舜躲指譬F，狻寂进行磷究所取得的成采。除文r{t已经注嘲0}用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重数贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。奉声明的法律责任由本人承担。论文{睾者签名：挞避日期：鲨丝：兰关于学位论文使用授权的声明奉人完伞了

2、解山东火学有关保留、使用学位论文的规定，llt]意学校保留或向潮家有关部l、j或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被鸯阀和借阋；本人授权iiI东大学可以将本学位论文的令都或部分内容缡入有美数攮瘁进行检索，司‘竣采囊影印、缀印袋其毯复翱手&徐存滏文鞠疹缀零学位论文。(保密论文在解密后应遵守此舰定)论文作者签名：盏陴导师签辱‘：谢．譬、＼y7山东人学博】：学位论文中文摘要文吕鱼(AmphiOXUS)属头索动物(cPp^“，Dc，fDrd“，“)，代表着从无脊椎动物到脊椎动物进化过程q，一个重要的过渡阶段。一方面，文昌鱼形体结构的基

3、本特钲与脊椎动物的祖先极为相似，使之成为研究脊椎动物形体模式发生机制进化的虽佳模型。另一方面从比较基因组的角度看，文昌鱼与脊椎动物的祖先歧化后独立进化长达5．5亿年，其自身种系的进化史利特有的基I捌倍增、功能分化和基因丢失也不容忽视。近些年的研究表叫，列脊椎动物和·j它亲缘天系接近的类群之间进行比较基因组分析，发育调控基因的系统进化分析，以及比较发育生物学的研究，可以提供很多有关脊椎动物起源和进化的线索，进～步揭示进化过程I{J基因和发育调控是如何改变的。因此虽然文昌鱼不是脊椎动物的直接祖先，但是它是现存的与脊椎动物直接祖先最接近

4、的无脊椎动物，是研究动物进化和动物胚胎发育的典型卡j剃。本文主要报道了田绕两个文l马鱼·{JH小层发育相关基因AmphiMdp和brp—like进行的研究I：作。AmphiM咖及其同源基因在文禺鱼和脊椎动物中的转录表达产物分布IX域相似，说明该基因在进化过程中保持了原有的功能：而打P—like]奠其同源皋因在文昌鱼和斑马鱼中的转录表达区域并不桐旧，说明该基因在进化过程中可能发qi了功能变化。首先介绍了文吕鱼肌肉发育相关基因AmphiMdp。最初，AmphiMdp是从文吕鱼I8h神经胁cDNA文库得到的-个长度为1J36bp的序列，

5、利用生物学软件分析其中一叮能有一个编码264个氨基酸n0"放蒯泼框。化足越过例J二比较该序列发现矿!

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8、二牧舟的蛋7f质W,J长度受比陔序列K．并H在jf『{测的起始衔frqj'-fi；j-没有找到同楸的终m崭码J，，⋯此推断J：魁订的eDNA足个缺少5’端的』【

9、段。通山东人学博I：学位论文过5’RACE实狳，得到～条600bpdr!纛稳序到，经潦廖分辑，浚痔别与眨有序列5’淌有l32bp的重叠区域。将延跃月；的j弘列进行网上比对，发现新的氨然酸序列在原有序列的基础上，向N端前延伸了122个氨摹酸。虽然新得到的蛋自

10、J手列仍然比其他的删源畿白的序列要缀，照楚分锯cDNA廖弱笈魏在起始寮鹞于菸蠢+个弱疆翁终lt密玛于，由此推灏褥到了完整的文昌熟AmphiMdpJl：放阕读椎。由文瑟鱼AmphiM如演绎的蛋白质与鸡MDP77汞1人p．taxilill的空『白j结构拥似，均具有coiled—coil区域，推测AmphiMdp可能’j其同源蛋白具有相似翅功能。SouthernBlotting中，磺多秘酶切焉的蒺鳗组DNA与隧税引豹杂交，缝鬃必鸯～条蒂存在，显示在文昌鱼}{nfAmphiM妇爵怒只有一个拷儿。琢位杂交结果娃示AmphfM如的转聚袭达分为

11、两个阶段。首先在早于文昌鱼受精后6h以1j{『的发育阶段没有检测到AmphiMdp的转录本杂交信号。从原肠早期(受精后6h)，1：始AmphiMdp蚋转隶产穆燕予舞中艇层：醚着譬鞠莲薹鼹浚不凝发育，；虿以存近辘中簸屡中观察至ljAmphiMdp较强的袋达；神经胚期，AmphiM妇在肌节巾的杂交信号可以很明显的观察铡；之后随着发育的进行，肌节中。的AmphiM却转录产物玎始ljJ前向后逐渐减少，即在发育q，的肌节中保留，但杂交信号适灏袋弱，在已彤成数辚=苇，{』逡瀑淤失：在幼虫嬲‘萁隽，沿露后辍簸最后璇仍能蕊豢碧ljAmphiM妇的

12、转录产褥；在受精焉72h的幼虫-扣束检测宝lJAmphiMdp的杂交信号。通过文献呵知AmphiMRF2是M)，oD家旗的戚!，：j，无论在高等动物还是在鞍为您蒋爨动物中MyoD鏊域的表达都是瓿璃组织特异的。对文舀"C￥J_AmphiMRF2秘Am