肺炎支原体外毒素cards tx的制备及特性研究

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1、膻盗支厦体处盎盍￡迦§!X论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：⑧论文作者签名：垒篁聱指导教师签名：答辩委员会主席：邹塑查圭堡医垣浙江太堂医堂睦随屉2L童医院委员1：粱鍪数拯浙江太堂附属筮二医睦委员2：睦咽蛆圭鱼医垣逝江省童回德医院委员3：委员4：委员5：堕瞳一医一医一一童一童一一丛且一厘屋一附一附一一随瞳医堂堂医一医一医一二堂堂箜大一太立江一江一灶逝逝揎瘟虹虹医一医一医一鱼鱼任一、王一、王一、王一盐红昱丞旦亚一浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文

2、中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝望盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位敝作者躲厉鼋蟹签字吼洲妒年上月2()日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝望盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：触睁导师签名签字日期：2。l饵∑月乙

3、易日签字日期浙江大学硕士学位论文致谢致谢时光流逝无痕，年华却掷地有声，做不到与时间的互不无惊无扰，到了说再见的时候，有些许憧憬新生活的迫不及待，但更多的是对这一片净土的恋恋不舍，从静美悠然的华家池校区到生机盎然的紫金港校区，从教室到实验室，从清晨到子夜，角角落落，点点滴滴，有刚开始的不熟悉、困惑，也曾茫然，但终归一路磕绊勇往直前。两年半浙江大学的研究生生活，感谢一路陪我走过的你们。感谢我的导师陈志敏教授，感谢您对我学业上的指导、鼓励，对我生活上的关心。您渊博的知识、严谨的治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，平易近人的人格魅力都让我受益匪浅。在此，谨向陈老师致

4、以最诚挚的谢意和衷心的祝福。感谢实验室杨军教授的悉心教导，杨老师不仅为我提供了优越而完善的科研平台，而且在论文的思路、设计都给予了指导。杨老师广博的知识、开阔的思路、清晰地逻辑思维都令人景仰，是我一生学习的楷模。感谢生命科学院杨卫军教授提供的学习机会和耐心指导，也感谢杨教授实验室的师兄师姐给予的热心帮助、细心传教、亲切关怀。感谢我的博士师姐李淑娴，从入学的点点滴滴小事到实验课题的方方面面问题都细心照顾。朝夕相处的淑娴师姐，学业上刻苦严谨、不懈追求，生活中开朗乐观、乐于助人、内心坚强、幽默诙谐，是我崇敬的师姐也是我挚交的朋友。感谢儿童医院各位师兄师姐师妹及同班同学的帮助：王

5、颖硕师兄、徐丹师姐、成云改师姐、杨德华、金芳、傅琳琛、杨霞、熊文依、王应曼、陈颖师妹，是你们生活上的帮助，学术上的探讨，让我的研究生生活丰富多彩。感谢公共卫生系毒理实验室这个温馨的大家庭。感谢张广林师兄、高向景师姐、吴一华师兄、池林峰师兄、姜英师姐、邵正萍师姐、肖素平师姐、单士刚师兄、徐玉英师姐、段婷、李金，在科研上对我的帮助、生活上对我的关心。感谢我的父母对我无私的爱和培养，是你们一直的支持和鼓励，才使得我选择医学并有机会进入浙江大学学习。真诚感谢我的老师、同学、朋友，感谢这一路给予我帮助的所有人12014年1月15日于紫金港浙江大学硕士学位论文中文摘要肺炎支原体外毒素

6、CARDSTX的制备及特性研究浙江大学医学院儿科学硕士研究生李雪静导师陈志敏中文摘要背景和目的：最新研究发现肺炎支原体(Mycoplasmapenumoniae，MP)毒力因子～社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(Community-acquiredrespiratorydistresssyndrometoxin，CARDSTX)参与MP侵犯呼吸道等病理生理过程。CARDS"IX是由MP基因MPN372编码表达的68KDa蛋白质，主要分布于MP胞膜表面和胞质，具有二磷酸腺苷核糖转移酶(ADP．ribosyltransferase，ART)活性，能造成宿主细胞空泡化，最终导致细胞

7、死亡，参与了MP肺炎等疾病过程。因而被认为是MP的一个重要毒力因子，对其的深入研究可能为MP感染的发病机制提供了一个新的研究方向。本研究拟在体外重组表达并纯化具有活性的CARDSTx，并制备其兔多克隆抗体。为了更好的阐明CARDSTX的特性以及其在MP感染发病机制中的作用，我们进一步研究了CARDSTX在人肺腺癌A549细胞中的定位，对DNA损伤的影响及对人视网膜色素上皮RPE细胞纤毛长度的影响。：方法：1．构建带有His。tag的表达载体Pet28b(+)-CARDS，经Ni柱纯化得到单一重组的CARDSTX(rCARDST