肝癌血管内皮细胞的异质性研究

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1、万方数据指导小组成员名单孙惠川吴伟忠王鲁朱小东主任医师研究员主任医师医师基金资助：“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2008ZXl0002．019／021)国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(81020108025)万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1Abstract．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l7CD31+和C

2、Dl05+TEC的功能比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37TEC与NEC及TEC与肿瘤细胞在基因水平的差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37第三部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一54肝癌血管内皮细胞来自肝癌细胞的研究验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．78文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一86肝癌血管内皮细胞的异质性对

3、抗血管生成治疗的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．86参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．90附件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯97致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．100论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1万方数据博士学位论文中文摘要肝细胞癌(简称“肝癌”)是世界上最常见的恶性肿瘤，是中国第二、全球第三的恶性肿瘤死亡原因。富血管作为肝癌的重要恶性特征之一，是肝癌

4、侵袭与转移的基本条件。抗血管生成治疗可明显抑制肝癌进展和延长患者生存，目前己成为治疗晚期肝癌的主要治疗方式之一。但是，抗血管生成治疗的总体疗效依然欠佳。由于血管内皮细胞的表面受体如VEGFR和FGFR等作为抗血管生成药物的主要靶点在正常血管与组织细胞亦广泛表达，抗血管生成药物靶向作用缺乏针对肿瘤血管的特异性。这一方面影响了正常血管产生较多的副作用致使患者停药，另一方面造成了脱靶效应并可能促进肝癌的侵袭转移，这些效应都在一定程度上削弱了抗血管生成治疗的疗效。因此，研究肝癌血管内皮细胞的特征及功能，寻找标记血管内皮细胞的特异性指标，

5、精确靶向肝癌血管内皮细胞，提高血管生成药物疗效，减少抗血管生成药物的副作用，己成为当前晚期肝癌治疗的主要研究方向之一。既往血管内皮细胞的研究主要是采用脐静脉内皮细胞(HUVEC)或体外长期传代的微血管内皮细胞(microvesselendothelialcell，MEC)或动物模型中的血管内皮细胞进行研究，不能体现肝癌患者本身肝癌血管内皮细胞的真实情况而有一定的局限性。本研究中，我们课题组通过建立免疫磁珠分选血管内皮细胞的技术平台，利用两种不同血管内皮细胞标记手段，分别在肝癌患者配对的肝癌组织与癌旁正常肝组织中分选出两种分子标记

6、的肝癌血管内皮细胞(tumor-derivedendothelialcells，TEC)及正常肝血管内皮细胞(normalendothelialcells，NEC)。为分析和比较不同表型的TEC及NEC的血管源性特征及功能，我们对TEC和NEC进行体外培养和传代，观察各自形态的差异，研究各自促血管生成的功能及对抗血管生成药物耐药性的差异。我们通过基因表达谱芯片技术筛选出TEC与NEC之间功能差异的关键基因。我们以肿瘤细胞(Tumorcells，TC，肿瘤组织中去除CD3l阳性细胞后的细胞)和肝细胞(Notumorcells，NT

7、C，肝组织中去除CD3l阳性细胞后的细胞)的基因表达谱作为参照，通过生物信息学的聚类分析及体内外功能实验分析TEC的特征及来源，并探讨其发生的可能分子机制，从而为抗血管生成药物治疗提供新的理论机制及寻找到新的治疗靶点。在本研究中，我们发现：1．我们采用两种血管内皮细胞特异性标记物CD31和CDl05作为分选标记物，万方数据博士学位论文中文摘要获得同一患者组织中CD3l+TEC／NEC以及CDl05+TEC／NEC，并能在体外培养及传代。2．对TEC和NEC进行体外功能试验和对抗血管生成药物反应的比较，证实TEC和NEC存在差异的

8、同时也发现CD31+TEC与CDl05+TEC存在差异：CDl05+TEC为纤维条索状形态，CD3l+TEC为典型的鹅卵石样形态；与CDl05+TEC相比较，CD31+TEC在小管形成能力、细胞增殖、凋亡以及对抗血管生成药物sorafenib的抵抗能力(增殖能力