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时间:2018-08-01
《噬菌体展示技术在肝癌肿瘤血管异质性研究中的应用和优化》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、噬菌体展示技术在肝癌肿瘤血管异质性研究中的应用和优化作者:徐泱孙惠川汤钊猷樊嘉周俭钦伦秀刘银坤【摘要】目的克服体内噬菌体展示技术在肝癌肿瘤血管异质性研究中应用的技术障碍。方法采用噬菌体体内分布及代谢实验研究噬菌体在裸鼠体内的分布及代谢规律,比较噬菌体饱和灌注、聚肌苷(PolyⅠ)及不同的活体灌洗技术对组织中噬菌体分布的影响。结果肝脏等网状内皮系统器官可非特异性结合噬菌体。这种结合可被空白噬菌体饱和灌注所抑制(P<0.01),而PolyⅠ无显著影响(P>0.05)。左、右心室加门静脉灌洗较单纯左心室灌洗可显著减少组织血
2、管中血液及未结合噬菌体的残留(P<0.01)。结论经过改进优化的体内噬菌体展示技术可为肝癌肿瘤血管异质性研究提供稳定、高效的技术平台。【关键词】噬菌体展示;肝肿瘤;肿瘤血管;异质性【Abstract】ObjectiveTocircumventtheobstacleofinvivophagedisplayforstudyofvascularheterogeneityinhepatocellularcarcinoma.MethodsThedistributionandmetaboliclawofphageintheathymi
3、cmousewasdetectedbyusinginvivophagedisplayandmetabolicexperimenttocomparethe15effectsoff1tetphagepresaturation,PolyⅠpreinjectionandmodifiedperfusionondistributionofphageinthetissues.ResultsThenonspecificphagetrappedbyliver(belongedtothereticuloendothelialsystem,R
4、ES)wasdecreasedsignificantlybypresaturationoffilamentousinsertlessphage(P<0.01),butnotaffectedbythepreinjectionofPolyⅠ(P>0.05).Leftandrightventricleplusportalveinlavagecouldmoresignificantlydecreasebloodvolumeinthevesselsandresidualsofuntrappedphage(P<0.01
5、).ConclusionThemodifiedinvivophagedisplayoffersanidealmethodforstudyofvascularheterogeneityinhepatocellularcarcinoma.【Keywords】Phagedisplay;Livertumors;Tumorvasculature;Heterogeneity肿瘤血管“异质性”15是血管生成研究中的热点。噬菌体文库体内展示技术在1996年一出现,就立刻成为血管异质性研究的理想工具[1-2]。现在,应用噬菌体展示体内筛选技术已得
6、到针对不同组织或肿瘤血管的特异性靶向分子[3-4]。但肝、脾等属于网状内皮系统的器官能够非特异性地吞噬或吸附噬菌体,而一直未有相关报道[5]。本研究的主要目的是探讨克服肝脏对噬菌体文库非特异性吞噬或吸附的方法,建立稳定、高效的肝癌噬菌体文库体内展示技术平台,为肝癌肿瘤血管异质性研究提供强有力的工具。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物:6周龄雄性BALB/c裸鼠,平均15~20g,购自中科院上海药物所,饲养在25℃恒温SPF级层流室,12h光照和12h黑暗交替,自由进食标准颗粒饲料及饮水。1.1.2噬菌体文库:Ph.D.7
7、噬菌体随机7肽库及M13mp19空白对照噬菌体购自美国NEB公司(Cat.No.E8100S;N4019S),f1tet空白噬菌体由中科院上海生物化学研究所惠赠。1.1.3其他试剂:聚肌苷(PolyⅠ)及兔抗M13噬菌体抗体购自美国Sigma公司(Cat.No.81354;B7786),ABC免疫组化试剂盒购自上海华美生物工程公司。1.2方法1.2.115肝癌原位种植裸鼠模型制备:按照我所李雁等[6]方法在雄性BALB/c裸鼠上制备高转移人肝癌原位种植模型。1.2.2噬菌体文库体内展示常规流程:动物麻醉后予尾静脉注射噬菌体。5
8、~8min后活体心脏灌洗。灌注结束后切下目标组织及对照组织,匀浆后反复洗涤,加入宿主细菌(ER2738大肠杆菌)复苏组织中的噬菌体测定滴度。目标组织中的噬菌体扩增后作下一轮筛选之用。1.2.3抗噬菌体免疫组化染色:染色方法按试剂盒说明书ABC法进行:组织切片常规
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