离磷诱导大鼠血管平滑肌细胞cbfa1及sox9动态变化的研究

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3、明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师辑歹狂≥忙年歹月咯日目录＼㈣恻Y2581983中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞Cbfal及Sox9动态变化的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7日lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l8附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述Cbfal在生理性成骨及血管钙化中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43中文摘要高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞Cbfal及Sox9动态变化的研究摘要目的：高磷是慢性肾脏病(chronicki血eydisease，CKD)患者心血管事件十分重要的非传统危险因素，血管钙化的存在及其程度则是心血管事件的独立预测因子。而CKD患者的血管钙化以中膜的钙化为突出表现。血管平滑肌细胞(vascularsmootllmusclecells，VSMCs)是血管中膜最主要的细胞成分，其发生类成骨／成软骨样的表型转化是血管钙化的关键

6、环节，其特点是出现骨源性基因的表达上调，尤其是核心结合因子a1(corebmdillgf．actora1，Cbfal)和性别决定区Y-box9(sexdetemlineregionY-box9，Sox9)被视为表型转化的标志物，但关于其表型转化的具体方向尚未有明确定论。本研究旨在通过体外模拟高磷环境刺激大鼠VSMCs，观察表型转化相关基因表达的动态变化，进而探讨VSMCs的表型转化方向，为高磷诱导的CI①患者血管钙化发生机制的阐明和防治提供一定的理论基础。方法：1血管平滑肌细胞的培养与鉴定去除血管外膜及内膜后，采用组织块贴壁法对大鼠胸主动

7、脉血管平滑肌细胞进行原代培养，使其经传代自然纯化，并通过形态学及免疫细胞化学的方法对其进行细胞鉴定。2实验分组及处理将生长状态良好的对数期VSMCs随机分为空白对照组、高磷组(肿组)及膦甲酸钠(phosphonofomicacid，PFA)组，空白对照组培养基为含10％胎牛血清(氨舰lbovinesenlIIl，FBS)的低糖DMeM培养基，HP组为10％FBS+10rIull01／Lp一甘油磷酸的高磷培养基，PFA组为10％FBS+10nullol／LD一甘油磷酸+lnun01／LPFA的PFA培养基，每24h更换一次培养基。检测给予刺

8、激后6h、12h、ld．5d中表型转化相关基因的动态表达情况。3高磷诱导后相关基因mRNA的表达情况应用反转录聚合酶链反应(ImPCR)方法测定空白对照组及唧组不中文摘要同时间点VSMCs中Cbfal、SoX9、Ⅱ型胶原a1(啪eIIcollagenal，ColIIal)、X型胶原a1(typeXc01lagena1，ColXal)mRNA的表达情况，以GADPH为内参，所有基因均采用同管扩增。4HP组及PFA组Cbfal的表达情况应用RT-PCR及Wbstemblot法测定肿组及PFA组不同时间点VSMCs中Cbfal在mRNA及蛋白水

9、平的表达情况。5统计学方法应用SPSS13．O统计学软件对实验数据进行统计学分析，实验结果用均数±标准差(元±s)表示，两组间均数的比较采用f检验，多组间均数的比较采用单因素方差分析(砧旧vA