改良的羟基磷灰石纳米载体性能及其体外基因转染研究

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1、万方数据中图分类号R764UDC6lO硕士学位论文学校代码密级10533改良的羟基磷灰石纳米载体性能及其体外基因转染研究TheStudyonthemodifiedHydroxyapatiteNanoparticles’capacityanditsGeneTransfectioninVitro作者姓名：刘明宇学科专业：临床医学研究方向：耳鼻咽喉头颈外科学院：中南大学湘雅医院指导教师：孙虹教授论文答辩日壤妙杨答辩委员令主席中南大学二。一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论

2、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：骝。导师签≤坦日期：埘哕月

3、轷日孙纩孓盼万方数据资助本课题的科研基金1．湖南省科技厅2007年度社发领域科技计划重点项目，2007SK2001；2．国家自然科学基金面上项目，30772402；3．国家自然科学基金面上项目，81170912；4．教育部博士点专项基金(博导类)，20110162110007；5．国家重大科学研究计划项目子课题，2014CB943003；6．国家自然科学青年基金项目，81300819。万方数据改良的羟基磷灰石纳米载体性能及其体外基因转染研究摘要目的测试课题组改良的纳米基因载体的理化参数，并观察其体外基因转染的性能。方法通过化学共沉淀一水热合成法合成羟基磷灰石纳米颗粒，用PEI做表面修饰以提高羟

4、基磷灰石纳米载体的DNA结合能力和转染效率，并应用穿透肽进一步提高其基因转染率。通过透射电镜观察纳米颗粒的形态和粒径、测定修饰前后的纳米羟基磷灰石在室温的悬浮稳定性、与DNA的结合和保护能力及体外细胞转染能力．结果1)带lJ备改良的羟基磷灰石纳米颗粒，有较高的DNA结合力(与DNA结合的质量比为50：1)。2)经PEI修饰后的nHAP具有更好的悬浮稳定性、DNA结合力更高(与DNA结合的质量比为12．5：1)，体外细胞转染率由原来的1．83％提升至8．14％。3)通过穿透肽进一步将转染效率提升至10．12％。结论1)经PEI修饰的羟基纳米磷灰石载体的悬浮稳定性和DNA结合能力都要优于单纯羟基纳

5、米磷灰石颗粒。2)结合穿透肽后，可进一步提高PEI修饰的羟基磷灰石纳米载体的体外转染效率。(图28幅，表3个，参考文献52篇)关键词：纳米羟基磷灰石；聚乙烯亚胺；化学共沉淀一水热合成法；基因载体；基因转染率；穿透肽分类号：R764万方数据TheStudyonmodifiedHydroxyapatiteNanoparticles’capacityanditsGeneTransfectioninVitroABSTRACTObjectiveTestthemodifiedhydroxyapatitenanoparticles(nHAP)’Sphysicochemicalparameters．Andob

6、serveitstransfectionefficiencyinvitro．MethodsHydroxyapatitenanoparticles(nHAP)werepreparedbyachemicalcoprecipitation-hydrothermalsynthesis．SurfacemodifiedwithPEItoimprovehydroxyapatitenanoparticlescarrierDNAbindingabilityandtransfectionefficiency．Andusethecellpenetratingpeptides(CPPs)tofurtherimprov

7、ethetransfectionefficiency．themodifiednHAP／PEI．nHAPweredeterminedfortheircapacityofsuspensionstability,DNAbindingandprotection，transfectionefficiencyofvitrocell．Results1、)Hydroxyapatitenanoparticles(n