纳米羟基磷灰石的改良及其体外基因转染研究

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1、中图分类号UDCR764616．2硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏纳米羟基磷灰石的改良及其体外基因转染研究ModificationofHydroxyapatiteNanoparticlesandTheStudyonitsGeneTransfectioninVitro作者姓名：学科专业：研究方向：学院．：指导教师：副指导教师：、、李茜临床医学耳鼻咽喉科学中南大学湘雅三医院孙虹教授蒋明副教授论文答辩日期塑!!：!：!：Z答辩委员会主中南大学2013年05月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中

2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：左墨日期：竺堡年三月盟Et作者签名：厶盏日期：竺堡年三月型学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论

3、文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：虚导师作者签名：坦竺导师期：坦!兰年￡月望日资助本课题的科研基金1．湖南省科技厅2007年度社发领域科技计划重点项目，2007SK20012．国家自然科学基金面上项目，30772402；3．国家自然科学基金面上项目，81170912；4．教育部博士点专项基金(博导类)，20110162110007。11纳米羟基磷灰石的改良及其体外基因转染研究摘要：目的：通过化学共沉淀．水热合成法制备纳米羟基磷灰石，研究其制备过程中的若干影响因素对纳米羟基磷灰石形态结构及稳定性的影响，通过改良纳米的制备条件，结合PEI进

4、行表面修饰，提高体外细胞的转染效率。方法：通过透射电镜观察及粒径、电位测定，选择优化参数，通过聚乙烯亚胺进行表面修饰，测定修饰前后的纳米羟基磷灰石在室温的悬浮稳定性、与DNA的结合和保护能力及体外细胞转染能力。结果：1、)改良的实验参数为：Ca／P比1．67：1、Ca(N03)2·4H20与(NH4、)2HP04的初始浓度为0．15mmol／L、慢速混合(15滴／分)，pH值为10～10．5、170℃，反应3小时、自然冷却(室温下放置24小时)。2)经PEI修饰后的nHAP具有更好的悬浮稳定性、DNA结合力及体外细胞转染率。结论：1)在纳米羟基磷灰石制备过程中，

5、C卯比、反应物初始浓度、反应物混合速率、反应pH值、反应的时问和温度等都会导致纳米的形态结构及热稳定性发生改变。2)当PEI浓度为4％0时，PEI—nHAP与质粒DNA结合稳定性最好。3)改良后的纳米羟基磷灰石转染Hela细胞的转染率约为6％，通过PEI修饰的纳米羟基磷灰石的转染率约为21％。(图25幅，表34个，参考文献31篇)关键词：纳米羟基磷灰石；聚乙烯亚胺；化学共沉淀一水热合成法；基因载体；基因转染率分类号：R764ModificationofHydroxyapatiteNanoparticlesandTheStudyonitsGeneTransfect

6、ioninVitroABSTRACT：Objective：Hydroxyapatitenanoparticles(nHAP)werepreparedbyachemicalcoprecipitation—hydrothermalsynthesis．Studyontheeffectsofgrowthofnanoparticlewithvariousfactors．Toimprovethetransfectione伍ciencyofvitrocellsbymodifiednHAPandsurfacemodificationwithPolyethylenimine(PE

7、I)．Methods：BymeansoftransmissionelectronmicroscopyobservationandSize、ZetadetectionaftersurfacemodificationwithPEI，themodifiednHAWPEI—nHAPweredeterminedfortheircapacityofsuspensionstability,DNAbindingandprotection．transfectionef矗ciencyofvitrOcell．Results：1)Theexperimentresultindicatet

8、hattheoptima