生长抑素及其受体(ssts)在大鼠视网膜无长突细胞上的表达以及对其突触前活动的调节

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1、复旦大学博士学位论文生长抑素及其受体（ssts）在大鼠视网膜无长突细胞上的表达以及对其突触前活动的调节姓名：柯江滨申请学位级别：博士专业：神经生物学指导教师：钟咏梅；王中峰20081014生长抑素及其受体(sst5)在大鼠视网膜无长突细胞上的表达以及对其突触前活动的调节中文摘要生长抑素(somatostatin，SRIF)是中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)中的一种神经活性肽，通过激活5种特异的受体亚型(sStl．5)行使其功能，可作为递质或调质起作用。在视网膜中，SRIF主要位于无长突细胞(amacrinecell，AC)上。已有文献表明，SSt{

2、-4在视网膜中均有表达，但在视网膜中仅有较低水平的sst5mRNA表达。在本工作中，我们研究了sSt5在大鼠视网膜AC上的表达。此外，由于缺少特异性受体拮抗剂(除sst29b)，有关不同SRIF受体亚型在神经元上生理功能的研究报道还很少。近年来，随着特异性sst5拮抗剂的发现，为我们研究sst5在视网膜中的功能提供了可能性。在本工作中，我们首次报道了生长抑素受体5亚型(sst5)在大鼠视网膜AC上的表达，并进一步研究TSRIF对培养的大鼠视网膜GABA能AC突触前抑制性递质释放的调节。应用免疫细胞化学方法，我们首先研究了sst5在大鼠视网膜AC上的表达。sst5的免疫标记弥散地遍

3、布整个内网状层，并在内网状层远端形成两条明显的荧光亮带。免疫双标实验显示，sst5表达在GABA能AC上。进一步的双标实验显示，sst5在酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase，TH)标记的多巴胺能AC和胆碱乙酰基转移酶(cholineacetyl-transferase，CHAT)标记的胆碱能AC上均有表达。免疫阳性标记主要出现在这些细胞的细胞膜和胞体．突起连接部。在胆碱能AC的位于内网状层的突起上也能观察到很弱的sst5标记。相反，在被Ca2+结合蛋i刍parvalbumin(PV)标记的甘氨酸能,All型AC上并没有sst5的陬j性标记。此外，SRIF与sst

4、5在多巴胺能和胆碱能AC上共表达。这些结果提示，SSt5在视网膜AC_I：可能作为自身受体和／或常规受体起作用。应用伞细胞膜片钳记录技术，我们进一步研究了SRIF对培养的大鼠视网膜GABA能AC突触前活动的调节。结果发现，在培养GABA能AC上可记录到微小抑制性突触后电流(miniatureinhibitorypostsynapticcurrent，mlPSC)，该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂bicuculline(10斗M)完全抑制，说明mlPSC是由突触后GABAA受体介导的。在此基础上，我们观察到llaMSRIF明显压抑mIPSC的频率，该压抑作用可被ssts和ssh

5、的特异拮抗剂部分阻断，说明SRIF是通过激活突触前sst5和／或sst2起作用。尽管SRIF略微压抑mIPSC的平均幅度，但并不改变mIPSC的动力学特性，如上升时间(dsetime)和衰减时间(decaytime)。提高胞夕bCa2+浓度增加mIPSC的频率，而在胞外高钙条件下，mIPSC频率同样可被lpMSRIF明显压抑。在去除胞夕bCa2+的情况下，mIPSC几乎被完全压抑，说明mlPSC对胞夕bCa2+有依赖性。进一步研究发现，200pMCdCl2阻断绝大部分mlPSC，提示电压门控Ca2+通道在其中起重要作用，因此，我们研究了L型Ca2+通道阻断剂nimodipine的

6、作用，发现10pMnimodipinel旺J显压抑mlPSC，提示突触前L型Ca2+通道与mlPSC密切相关。此外，5pMforskolin(腺苷酸环化酶激活物)增jJI：lmlPSC的频率，而PKA的特异性抑制剂Rp．cAMP(20pM)降低mlPSC的频率。在Rp．cAMP存在的情况下，SRIF对mlPSC不再有压抑作用。这些结果提示，SRIF激活特异性受体后可能抑制cAMP—PKA通路，继而限制胞夕bCa2+通过电压门控Ca2+通道的内流，从而减少GABA能AC突触前GABA的释放。综上所述，本工作研究了ssts在大鼠视网膜AC上的表达，并进一步显示sst5和／或sst2部

7、分介导了SRIF对GABA能AC突触前GABA释放的压抑作用，进而探讨了这种压抑作用的可能机制。关键词免疫荧光双标、自身受体、多巴胺能无长突细胞、胆碱能无长突细胞、微小抑制性突触后电流、胞外钙离子浓度、钙离子通道、腺苷酸环化酶、递质释放中图分类号：Q42Expressionofsomatostatinreceptor5andmodulationofsomatostatinonpresynapticactivityinratretinalamacrinecells英文摘要Somat