氧化-内质网应激信号途径在弓形虫感染致胎盘滋养细胞凋亡中作用的研究

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1、学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名：日期：学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士学位论文

2、全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国学位论文全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版，并同意编入CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：导师签名：日期：日期：目录英文缩略词对表…………………………………………………………1中文摘要…………………………………………………………………3英文摘要…………………………………………………………………71前言…………………………………………………………………13第一部分：弓形虫孕期急性感染小鼠

3、模型的建立及母胎界面氧化应激反应的研究………………………………………………………19研究背景………………………………………………………………192材料与方法………………………………………………………202.1研究对象…………………………………………………………202.2主要试剂…………………………………………………………202.3部分试剂的配制…………………………………………………212.4主要仪器及来源…………………………………………………232.5实验方法…………………………………………………………252.5.1弓形虫RH株速殖子的复苏与冻存……………………………252.

4、5.2小鼠弓形虫感染传代及弓形虫速殖子的收集………………252.5.3建立稳定的弓形虫感染孕期小鼠模型………………………252.5.4标本收集，RNA提取和质量鉴定………………………………262.5.5逆转录反应……………………………………………………292.5.6PCRAssay分析胎盘氧化/抗氧化相关基因转录水平………302.5.7胎盘组织和外周血弓形虫含量定量检测……………………322.5.8胎盘组织匀浆和蛋白浓度测定………………………………332.5.9胎盘组织匀浆还原型谷胱甘肽测定…………………………342.5.10胎盘组织匀浆脂质氧化产物丙二醛检测……………………

5、372.5.11胎盘组织匀浆8羟基脱氧鸟苷含量测定……………………382.5.12数据处理和统计分析…………………………………………393结果…………………………………………………………………393.1弓形虫孕期急性感染小鼠模型数据……………………………393.2胎盘组织RNA浓度和质量测定……………………………………403.3弓形虫感染及NAC预处理对胎盘组织氧化/抗氧化基因转录水平的影响………………………………………………………………413.4不同孕天孕鼠外周血及胎盘组织弓形虫负荷…………………453.5三组不同孕天胎盘组织匀浆还原性谷胱甘肽的含量…………463.6三组不

6、同孕天胎盘组织匀浆丙二醛的含量……………………473.7三组不同孕天胎盘组织匀浆8羟基脱氧鸟苷的含量……………484小结………………………………………………………………50第二部分：氧化-内质网应激在弓形虫感染致胎盘滋养细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸干预研究…………………………………52研究背景………………………………………………………………522材料与方法………………………………………………………542.1研究对象…………………………………………………………542.2抗体和试剂………………………………………………………542.3部分试剂的配制……………………………………

7、……………552.4主要仪器和来源…………………………………………………572.5实验方法…………………………………………………………582.5.1实验分组和处理………………………………………………582.5.2胎盘组织标本的收集和处理…………………………………582.5.3胎盘细胞悬液的制备…………………………………………592.5.4滋养细胞的分离和原代培养…………………………………592.5.5原代培养的滋养细胞免疫学鉴定……………………………602.5.6Transwell体外弓形虫感染实验……