氧化-内质网应激信号途径在弓形虫感染致胎盘滋养细胞凋亡中的作用研究

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1、目录英文缩略词对表…………………………………………………………1中文摘要…………………………………………………………………3英文摘要…………………………………………………………………71前言…………………………………………………………………13第一部分：弓形虫孕期急性感染小鼠模型的建立及母胎界面氧化应激反应的研究………………………………………………………19研究背景………………………………………………………………192材料与方法………………………………………………………202.1研究对象…………………………………………………………20

2、2.2主要试剂…………………………………………………………202.3部分试剂的配制…………………………………………………212.4主要仪器及来源…………………………………………………232.5实验方法…………………………………………………………252.5.1弓形虫RH株速殖子的复苏与冻存……………………………252.5.2小鼠弓形虫感染传代及弓形虫速殖子的收集………………252.5.3建立稳定的弓形虫感染孕期小鼠模型………………………252.5.4标本收集，RNA提取和质量鉴定………………………………262.5.5逆转录反应……………

3、………………………………………292.5.6PCRAssay分析胎盘氧化/抗氧化相关基因转录水平………302.5.7胎盘组织和外周血弓形虫含量定量检测……………………322.5.8胎盘组织匀浆和蛋白浓度测定………………………………332.5.9胎盘组织匀浆还原型谷胱甘肽测定…………………………342.5.10胎盘组织匀浆脂质氧化产物丙二醛检测……………………372.5.11胎盘组织匀浆8羟基脱氧鸟苷含量测定……………………382.5.12数据处理和统计分析…………………………………………393结果…………………………………………………

4、………………393.1弓形虫孕期急性感染小鼠模型数据……………………………393.2胎盘组织RNA浓度和质量测定……………………………………403.3弓形虫感染及NAC预处理对胎盘组织氧化/抗氧化基因转录水平的影响………………………………………………………………413.4不同孕天孕鼠外周血及胎盘组织弓形虫负荷…………………453.5三组不同孕天胎盘组织匀浆还原性谷胱甘肽的含量…………463.6三组不同孕天胎盘组织匀浆丙二醛的含量……………………473.7三组不同孕天胎盘组织匀浆8羟基脱氧鸟苷的含量……………484小结………………………

5、………………………………………50第二部分：氧化-内质网应激在弓形虫感染致胎盘滋养细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸干预研究…………………………………52研究背景………………………………………………………………522材料与方法………………………………………………………542.1研究对象…………………………………………………………542.2抗体和试剂………………………………………………………542.3部分试剂的配制…………………………………………………552.4主要仪器和来源…………………………………………………572.5实验方法………

6、…………………………………………………582.5.1实验分组和处理………………………………………………582.5.2胎盘组织标本的收集和处理…………………………………582.5.3胎盘细胞悬液的制备…………………………………………592.5.4滋养细胞的分离和原代培养…………………………………592.5.5原代培养的滋养细胞免疫学鉴定……………………………602.5.6Transwell体外弓形虫感染实验………………………………612.5.7胎盘细胞悬液和原代培养滋养细胞的流式凋亡分析………612.5.8TUNEL原位分析胎盘组织凋亡

7、水平……………………………622.5.9原代培养细胞GSH水平测定……………………………………622.5.10荧光定量PCR检测氧化-内质网应激相关分子的转录水平…632.5.11胎盘组织和原代培养滋养细胞蛋白的提取…………………652.5.12Westernblot分析内质网应激和前凋亡途径相关标记物…662.5.13数据处理和统计分析…………………………………………693结果………………………………………………………………693.1滋养细胞原代培养形态和免疫学鉴定…………………………693.2不同孕天胎盘细胞悬液流式凋亡检测结果…

8、…………………713.3原代培养滋养细胞的流式凋亡检测结果………………………733.4TUNEL原位分析胎盘组织凋亡水平………………………………753.5荧光定量PCR检测氧化-内质网应激相关分子的转录水平……773.6