牛环形泰勒虫昆明白小鼠繁殖模型与间接荧光抗体检测法的建立

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的试验材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：赫涛时间：1。f千年毛月D日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采

2、用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：袜嘀导师签名：时间：2Dl牛年6月13日时间：Z。f牛年己月13日万方数据牛环形泰勒虫昆明白小鼠繁殖模型与间接荧光抗体检测法的建立摘要牛梨形虫病是由泰勒虫和巴贝斯虫引起的一种蜱传血液原虫病的总称(旧称焦虫病)，在我国(包括我区)致病率及其危害最严重的是牛环形泰勒虫(Theileriaannulata)

3、，OIE将其列为B类疫病。多呈急性经过，以高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿胀为特征，急性病例死亡率较高；主要流行于我国西北、华北和东北的一些省、自治区，在我区广泛流行，其感染率可达60％以上，严重威胁养殖牛业的健康发展。因此，将牛环形泰勒虫地方流行株接种于试验动物进行扩繁，研制玻片裂殖子抗原的基础上，建立准确、灵敏、快速的间接荧光抗体检测方法(IFAT)等，对该病的早期诊断、流行病学研究和综合防治提供技术支持。(I)本试验研究，对同胎、体重209左右、雌雄对半的40只昆明白小鼠进行摘除脾脏的手术，并以被去除脾脏的昆明白小鼠为

4、实验动物，接种牛环形泰勒虫地方流行株，进行体内扩繁试验(invivo)，并每隔8h、12h、24h、8h及3d～10d观察分析其染虫率，在小鼠体内扩繁情况等；经小鼠心脏、眼球采血的方法收集其最高染虫率(15％以上)的血液内裂殖子，并进行冻存，摸索其保存、复苏条件等。试验结果显示，术后有37只鼠存活，检测其呼吸、心跳、食欲、精神状态皆良好，说明摘脾手术成功：接种后的第2d可在小鼠血液里观察到裂殖子，第5d-9d每组小鼠的平均染虫率可达15％---20％(最高峰)，第10d后染虫率开始下降，渐渐在血液涂片中观察不到裂殖体；经试验发现

5、牛源性环形泰勒虫在除脾脏昆明白小鼠体内能被置换、增值；在雌雄昆明白小鼠体内的扩繁率差异极显著(P=O。007<0．01)，而去脾昆明白与未去脾昆明白小鼠的染虫率极显著(P=O．0002<0。01)；染虫率为15％以上时的昆明白小鼠血液里的裂殖子可用冷冻法(一80。c)保存，亦可制作玻片裂殖子抗原备用，保存后的半年内的裂殖体复苏活性良好。该试验数据可为建立牛环形泰勒虫动物模型，为教学、科研提供丰富的虫株资源。(II)本试验研究，应用阳性牛环形泰勒虫病例的血液源性裂殖子和经昆明白小鼠扩繁的裂殖子(试验I方法制作的玻片抗原，保存于．8

6、0。C备用)作为已知抗原，经十字交叉法分别将一抗(1：20---1：640)和二抗(1：20--1：1600)梯度稀释，摸索和确其最佳工作浓度，建立牛环形泰勒虫病的间接荧光抗体检测方法(IFAT)；经特异性(观察其与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫是否有交叉反应)、重复性试验等验证其重复性及灵敏度，并运用所建立的方法对疑似牛环形泰勒虫抗体样品(n=290)万方数据进行了检测。试验结果显示：自制的牛环形泰勒虫玻片裂殖子抗原在．80。c条件下能保存半年之久，复苏后仍然具有较好的抗原性；牛环形泰勒虫间接荧光抗体检测方法的一抗(被检血清)和二抗

7、(荧光标记兔抗牛IgG)最佳工作浓度分别为1：80和1：100稀释度；该方法检测样品，与牛巴斯虫、双芽巴贝斯虫未出现交叉反应：被检测血清稀释至1]1：1600仍然可以检测到裂殖子荧光：批内和批间重复检测，变异系数均小于10％；应用所建立的方法成功检测了采自疑似区牛被检血清样品290份，阳性率为72．4％(210／290)，本次牛环形泰勒虫的检出率高于血液涂片染色镜检法(阳性率为27．6％(80／290)。本试验研究可为牛环形泰勒虫病的诊断提供玻片裂殖子抗原资源：所建立的IFAT方法，其敏感性较高、特异性和重复性较好，可用于该病的

8、早期诊断，可为综合防控奠定基础。关键词：牛环形泰勒虫；昆明白小鼠接种；地方株的扩繁；玻片裂殖子抗原；间接荧光抗体法III万方数据EstablishmentofXinjiangEpidemicStraininvivoTestofTheileriaannulataa