runx1在脑死亡供体肝脏中作用机制研究

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1、万方数据中图分类号隧UDC610博士学位论文学校代码!Q蔓33密级公珏Runxl在脑死亡供体肝脏中作用机制研究TheexperimentalstudyonmechanismofRunxlfortheliverfrombraindeathdonor作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：赵杰临床医学外科学及器官移植中南大学湘雅三医院叶放发教授论文答辩日期丛鲣鳃12J日答辩委员会主席中南大学2014年5月／名’严万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工

2、作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或

3、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：垒垄导师签名丝趟乏／1—．、日期：业年—￡月』上E1日期：盟年』二_月二上日万方数据Runxl在脑死亡供体肝脏中作用机制研究摘要第一章兔脑死亡肝脏差异蛋白表达趋势检测目的根据前期蛋白质组学技术筛选出的显著性差异蛋白Runxl，研究其在脑死亡肝脏中表达趋势变化。方法使用免疫组化、PCR、westernblot在转录翻译水平验证Runxl蛋白在脑死亡肝脏中表达水平变化。结果免疫组化、RT．PCR

4、、Westernblot检测脑死亡后Runx1蛋白在肝脏中表达水平变化，发现随着脑死亡持续时间延长，Runxl蛋白呈下降趋势，在8小时时间点表达水平最低(P

5、二章Runxl蛋白对缺血缺氧肝脏细胞作用的体外实验研究目的体外细胞实验探索Runxl蛋白对缺血缺氧肝脏细胞的作用。方法使用质粒为载体的全长度RunxleDNApEGFP—N1一RUNXl转染大鼠肝脏，使Runxl基因过表达；转染pEGFP-N1为阴性对照组，对质粒转染后的大鼠肝脏细胞进行缺血缺氧处理；实验分为四组：对照组(C组)、缺血缺氧组(IS)、转染阴性对照+缺血缺氧组(S+IS)、Runxl过表达+缺血缺氧组(OS+IS)。流式细胞仪检测各组大鼠肝脏的细胞凋亡率，检测TGF．13、Bcl．2、Bim、T

6、NF。QmRNA表达水平，研究Runxl蛋白对缺血缺氧细胞肝脏作用机制。结果pEGFP-N1．RUNXl转染大鼠肝脏细胞48小时后Ruxl蛋白表达水平达到峰值。PCR和Westernblot检测Runxl表达水平在IS组和S+IS组较对照组明显降低(P

7、Bcl一2、Bim、n师一amRNA表达水平。在IS组、S+IS组、OS+IS组中，TGF．BmRNA表达水平全部升高(PO．05)。在IS组和S+IS组中，Bcl．2mRNA与C组相比表达水平显著降低(P0．05)，Bim、TNF—a表达水平显著升高(P<0．05)；在OS+IS组中Bcl．2mRNA表达水平明显升高(P<0．05)，Bim、TNF—amRNA表达水平明显降低(P<0．05)。Runxl表达水平的改变引起了Bc

8、l一2／Bim、TNF．OcmRNA表达水平的显著改变，因此Bcl．2／Bim、TNF．a是受到Runxl蛋白调控的下游信号分子。结论体外细胞实验证实，肝脏细胞在缺血缺氧后，Runxl明显降低，TGF．13、Bim、TNF—a等细胞凋亡相关因子明显升高；采用pEGFP．N1．RUNXl真核载体转染方法可有效的使Runxl在转录和翻译水平表达增加。过表达Runxl后，TGF，B表达含量无明显变化，而B