人源福氏志贺菌对雏鸡的致病性及鸡肠组织β1基因表达特性研究

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1、河南农业大学硕士学位论文人源福氏志贺菌对雏鸡的致病性及鸡肠组织β1基因表达特性研究姓名：吕文强申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：陈陆201206河南农业大学2012届硕士毕业论文摘要志贺菌为革兰氏阴性病原菌，已被证明是引起人细菌性痢疾的病原。志贺氏菌可分为福氏志贺菌，鲍氏志贺菌，宋内志贺菌和痢疾志贺菌四个群。由福氏志贺菌引起的细菌性痢疾主要流行在大多数发展中国家，而且引起的死亡率超过任何其他志贺菌。人源福氏志贺菌侵袭人的结肠黏膜后在肠上皮细胞内寄居，同时引起强烈的炎症反应，导致结肠黏膜破坏，并最终引发细菌性痢疾。2

2、004年，许兰菊、王川庆等首次发现志贺菌感染鸡的病例，这一发现对公共卫生意义重人。志贺菌感染鸡的侵袭机制的研究国内外还没有，而且禽类和哺乳动物在组织结构、体内环境等有很人差异。为此，本文针对人源福氏志贺菌对SPF鸡的感染力、侵袭动态过程以及相关受体进行初步研究，旨在阐明人源志贺菌对鸡感染的机制，为进一步揭示志贺菌的致病机理和理解宿主谱扩大的机制有重要意义。为确定人源福氏志贺菌在实验室环境下对雏鸡的致病力。选取一株分离白人的福氏志贺菌作为感染菌，在实验室环境’F对3日龄无特殊病原(SPF)鸡以嗉囊注射和腹腔注射两种方式分别感染

3、，观察临床症状及剖检病变，并在攻毒一周后采集主要组织样品进行病理组织切片观察。结果显示肠道明显充血、肿胀，光镜一F发病动物肠黏膜有明显的病理变化，表现为水肿、充血；感染途径不同，病变程度有所差异，腹腔注射组较嗉囊注射组严重。心脏、肝脏等组织的结构人致完整，病理改变不明显。由此得出结论：人源福氏志贺菌对SPF雏鸡有致病性，主要感染雏鸡的肠组织，对其他主要组织也有一定程度的影响。为进一步研究人源福氏志贺菌对雏鸡的侵袭特性，对3日龄SPF鸡进行肠袢攻毒试验，分别于攻毒后2h、6h、12h取山试验鸡整段肠组织，进行免疫组化和电镜观察

4、。免疫组化观察可知：空肠利同肠段上皮细胞内观察到忐贺菌体的存在，十二指肠、盲肠和直肠则未检测到；电镜结果显示，在空肠同肠段上皮细胞内观察到菌体，与免疫组化结果一致。以上试验可知，人源福氏志贺菌能侵袭雏鸡肠上皮细胞，侵袭部位主要集中在空肠和回肠。为鉴定pl整合素在雏鸡肠组织中时空表达特点，设计一对引物，建立反转录PCR方法对p1mRNA进行鉴定，在鉴定完成的Dl基因序列上选取保守区域设计一对定量PCR引物，同时选取GAPDH基冈为内参，将B1和内参扩增产物与PMDl8-T载体连接，构建重组质粒作为定量检测的标准鼎，建立检测鸡B

5、1mRNA表达水平的SYBRGreenl实时荧光定量(Q．PCR)方法，并采用该方法对1．20日龄商品鸡肠组织不同部位中p1mRNA表达水平进行检测。结果显示不同日龄不同肠段p1mRNA相对表达量具有差异，十二指肠和盲肠组织中D1mRNA表达量在1日龄最高，之后随着日龄增加而下降，空肠、回肠和直肠在l-lO日龄内呈上升趋势，空肠和直肠在lO日龄达到最高，回肠在5日龄最高。本研究初步证明了人源福氏志贺菌对鸡具有致病性，雏鸡肠组织中存在B1的表达，其表达量可能与志贺菌的感染日龄有关。本文为进一步研究志贺菌感染鸡的侵袭机制提供了研

6、究基础。关键词：人源福氏志贺菌；致病性；免疫组化；B1整合素；荧光定量PCR河南农业大学2012届硕士毕业论文PATHoGENICITYOFHUMANSHIGELLAFLEXNElUToCHICKENANDTHEEXPRESSION0Fp1GENEINCmCKENII盯ESTINESupervisor．Prof．：ChenLuWangChuanQingMasterCandidate：LvWenQiangABSTRACTShigellaisagenusofgram．negativebacilli．Ithasbeenproved

7、t0bethepathogenofcausinghumandisease．ShigellaCanbedividedintofourgroups：Shigellaflexneri，Shigellaboydii，ShigellasonneiandShigelladysentery．S．Shigellaareoftenfoundindevelopingcountries，andcausemoremortalitythananyotherShigellagroup．Byinvadingthecolonicmucosa，S．Shige

8、llacancausehuman’Sbacillarydysentery,accompanyingwitllastronginflammatoryresponseinhumanintestineafterenterintointestinalepithelialcells，atthesam