脂联素对心力衰竭小鼠心肌纤维化的作用

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1、泰山医学院硕士学位论文脂联素对心力衰竭小鼠心肌纤维化的作用姓名：丁科扬申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李秀昌2012-05脂联素对心力衰竭小鼠心肌纤维化的作用研究生：丁科扬专业：内科学导师：李秀昌副教授中文摘要前言心肌纤维化(myocardial舳rosis，MF)是指在心肌的正常组织结构中细胞外基质过量积聚、心脏组织中胶原浓度显著升高导致间质纤维成分增多或心肌细胞死亡从而被纤维组织替代。该病理变化存在于多种心血管系统疾病中，是心脏功能由代偿期向失代偿期转变的关键性因素。既往研究表明血清脂联素与心肌纤维化呈负相关，但脂联素

2、是否是心肌纤维化的内源性保护机制尚未研究，为了排除临床较多的干扰因素，本研究在此基础上，进一步在实验动物中探讨脂联素与心肌纤维化的因果关系。目的(1)建立小鼠心肌纤维化模型；(2)观察小鼠心肌纤维化模型给予外源性脂联素后，脂联素对心肌纤维化的影响，以期探寻心肌纤维化发病的新机制和防治的新策略。方法(一)异丙。肾上腺素腹腔注射建立小鼠心肌纤维化模型1．SD雄性小鼠20只，体重30～459，将实验动物随机分为4组，分别为正常对照组、3mg厥g组、5mg／kg组和7．5mg瓜g组；腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)，连续3天；2．实验第5周

3、后，采用Doppler超声心动图比较其反应心功能的FS％值；3。天狼星红染色偏振光显微镜下观察左室心肌I、III型胶原形态并测量胶原容积分数CVF％，评价小鼠心肌纤维化程度及成模率。(二)脂联素对心肌纤维化小鼠I、III型胶原mRNA及蛋白表达的影响1．SD雄性小鼠30只，体重30~459，将实验动物随机分为3组，分别为模型组(ISO组)、脂联素干预组(APN+ISO组)及正常对照组(Con仃ol组)。模型组、脂联素干预组采用异丙肾上腺素(7．5mg瓜g)制备心衰模型，并于实验第4天起对脂联素干预组腹腔注射小鼠重组脂联素10pg／

4、(kg·d)；正常对照组、模型组给予等量生理盐1水腹腔注射；2．实验第5周采用天狼星红染色偏振光显微镜下观察左室心肌I、III型胶原形态并测量胶原容积分数CVF％；3．应用Realtime．PCR的方法测定各组小鼠心肌I、IⅡ型胶原mRNA表达水平；4．应用WestemBlot的方法测定各组小鼠心肌I、III型胶原蛋白的表达。(三)计数资料采用均数土标准差(i士s)表示，各组间样本均数的比较采用单因素方差分析，以尸<0．05认为有统计学意义。全部数据采用SPSS13．0统计软件进行统计学处理。结果(一)异丙肾上腺素腹腔注射建立小鼠

5、心肌纤维化模型1．Doppler超声心动图显示，7．5mg瓜g组与℃orltrol组比较FS值明显下降(分别为26．92士2．90％VS32．36士2．81％，P<0．05)，提示心脏缩短分数随着ISO剂量的增加而降低。2．对心肌组织进行天狼星红染色并采用偏振光显微镜观察，结果显示7．5mg瓜g组心脏间质I、III型胶原明显增多，形成间质纤维化，I型胶原粗大呈亮红色，排列及分布紊乱，反复重叠；III型胶原呈黄绿色穿插其中，CVF值(ColIagenvolumefigure，胶原容积积分)与Contr01组比较明显升高(分别为6．2

6、2土0．43％VS4．58土0．41％，PO．05)，提示腹腔注射ISO7．5mg爪g可制成心肌纤维化小鼠模型。(二)脂联素对心肌纤维化小鼠I、III型胶原mI斟A及蛋白表达的影响根据第一部分实验结果，采用7．5mg瓜g剂量制备小鼠心肌纤维化模型。1．天狼星红

7、染色偏振光法显示，Control组I、I工I型胶原分布较少，颜色较淡。ISO组心脏间质I、III型胶原明显增多，形成间质纤维化，I型胶原粗大呈亮红色，排列及分布紊乱，反复重叠；III型胶原呈黄绿色穿插其中，提示心肌纤维化明显加重；IS0组与Control组比较CVF明显升高(分别为6．41士O．37％VS4．68士0．30％，尸<0．01)。ISO+APN组与ISO组比较CVF明显降低(分别为5．94士O．35％VS6．4l土0．37％，尸

8、I、Ⅲ型胶原mRNA的表达：ISO组I、III型胶原mRNA相对表达量明显高于Control组(I型胶原分别为3．01土0．78VS1．00，III型胶原分别为2．39士0．70VS1．00；尸均<0．01)，表明心肌纤维化小鼠心肌I、III型胶原