欧前胡素体内外代谢研究及半枝莲质量控制方法研究

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1、河北医科大学硕士学位论文欧前胡素体内外代谢研究及半枝莲质量控制方法研究姓名：乔湜申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：王巧201203中文摘要欧前胡素体内外代谢及半枝莲质量控制方法研究摘要欧前胡素为线型呋喃香豆素，是北沙参、白芷和独活等伞形科植物的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理作用。欧前胡素的排泄研究表明，欧前胡素仅有少量以原型形式排出体外，提示欧前胡素在体内易发生生物转化。本研究以欧前胡素为研究对象，以高效液相色谱．质谱联用技术(HPLC．MS)为分析手段，探讨欧前胡素体内外代谢情况。采用HPLC—QTrap．M

2、S技术鉴定大鼠灌胃欧前胡素后尿液、粪便、胆汁以及肝微粒体孵化液中的代谢物，并探讨体内外代谢的相关性。同时，采用HPLC．QTof-MS技术进一步分析大鼠灌胃欧前胡素后尿液样品，结合两部分的鉴定结果，总结欧前胡素及其代谢产物的质谱裂解规律，阐明欧前胡素在大鼠体内的代谢途径及转化规律，为欧前胡素及其它呋喃香豆素的代谢研究提供理论基础和依据。半枝莲为唇形科(Labiatae)植物半枝莲(ScutellariabarbataD．Don)的干燥全草，临床上主要用于治疗癌症、炎症以及泌尿系统等疾病。半枝莲产地广泛，不同产地和采收季节的半枝莲的

3、化学成分也存在差异，临床上半枝莲及其伪品的混淆较为常见。本研究建立了专属、灵敏、快速的HPLC-MS／MS方法同时测定半枝莲中7种黄酮和4种酚酸类成分，用于18批不同产地药材及3批伪品的比较与评价，为半枝莲的质量控制提供了有效分析方法。第一部分欧前胡素体内外代谢研究目的：1．建立灵敏、有效的HPLC．QTrap．MS方法，同时鉴定大鼠灌胃欧前胡素后尿液、粪便、胆汁及肝微粒体孵化液中的代谢产物，并探讨体内代谢与肝微粒体转化的相关性。2．应用HPLC．QTof-MS技术分析大鼠灌胃欧前胡素后尿液样品，推测欧前胡素在大鼠体内的代谢途径。

4、方法：1．联合应用HPLC．QTrap—MS技术的MRM／MIM．IDA．EPI(多离子监测．信息依赖．增强型子离子扫描)、PREC．ER-IDA．EPI(母离子扫描一增强分辨率扫描．信息依赖．增强型子离子扫描)和EPI(增强型子离子扫描)模式鉴定大鼠灌胃欧前胡素后尿液、粪便、胆汁和肝微粒体孵化液中文摘要中的代谢产物。依据PREC．ER-IDA．EPI中的【M十H】+$11[M+NH4]+离子判断代谢物的分子量，结合3种模式的EPI信息对代谢物进行结构表征。2．采用HPLC．QTof-MS技术进行TOF．MS．IDA．4MS／MS

5、扫描，应用数据挖掘系统MetabolitePilot中的XIC(提取离子色谱)，MDF(质量亏损)，PIF(母离子过滤)和NLF(中性丢失过滤)等分析功能，获得代谢物的精确分子质量、元素组成和一级、二级质谱图，筛选和鉴定欧前胡素的代谢物。生物样品采集处理方法：大鼠灌胃给与欧前胡素后，收集大鼠的尿液、粪便、胆汁，采用低温差速离心法制备肝微粒体，温孵欧前胡素得孵化液样品。所有生物样品经液．液萃取进行分离纯化，氮气吹干并用甲醇复溶。实验采用AgilentZorbaxEclipseXDB．C18(150mm×4．6mm，5gm)色谱柱进行

6、分离，梯度洗脱，流动相为甲醇．1mmol／L的醋酸铵，流速为1．0mL／min。结果：1．采用ItPLC．QTrap．MS技术，鉴定出尿样中32个代谢物、粪样中14个代谢物，胆汁中6个代谢物以及肝微粒体转化17个代谢物，欧前胡素体内外代谢具有较好的相关性。2．采用HPLC．QTof-MS技术，鉴定出尿样中51个代谢物(44个I相代谢物和7个II相代谢物)，并推断出欧前胡素在体内可能的代谢途径。结论：1．HPLC．QTrap．MS方法灵敏、有效，且MRM／MIM．IDA．EPI、PREC．ER-IDA．EPI和EPI模式联合应用在代

7、谢鉴定方面具有超越单一模式的优越性。2．HPLC．QTof-MS方法灵敏度高、专属性好、准确度高、简便快捷，在单一运行中即可鉴定代谢物，是研究药物代谢的一种切实可行的方法。结合两部分鉴定结果表明：(1)欧前胡素在大鼠体内发生广泛的生物转化。(2)主要在肝脏中代谢并经肾脏排泄。(3)推断出欧前胡素在大鼠体内的代谢途径。(4)欧前胡素的体内外生物转化具有较好的相关性。第二部分液质联用技术同时测定半枝莲及其伪品中黄酮和酚酸类成分目的：建立HPLC．MS／MS方法同时测定半枝莲及其伪品中7种黄酮和4种酚酸类成分，并结合聚类分析用于控制半枝

8、莲的质量。方法：采用多反应监测(删)模式同时测定7种黄酮类和4种酚酸类成分。ESI源，负离子监测模式，源喷射电压为．4500V，离子源温度为650℃。11种被测成分的监测离子对分别为153．0／108．9(原儿茶酸)、2中文摘要353．1／191．