近海细菌hzo基因及古菌amoa基因多样性研究毕业论文

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1、中国石油大学（华东）本科毕业设计（论文）中国石油大学（华东）毕业设计（论文）近海细菌hzo基因及古菌amoA基因多样性研究学生姓名：学号：专业班级：环境工程指导教师：中国石油大学（华东）本科毕业设计（论文）摘要胶州湾和海南岛海域优美的自然环境与独特的地质演化进程吸引了众多中外科学家的关注。这种复杂的地质演化过程必然也伴随着生物的不断进化。本实验中涉及的hzo和amoA基因序列可用于物种多样性的分析，相对于比较DNA所有序列，更简便并具有代表性。本实验通过对胶州湾A5站位微生物hzo基因以及海南岛海域E505站位

2、amoA基因的PCR扩增，转入感受态大肠杆菌，酶切分析，测序比功能比对等一系列步骤，分别建立这两站位的微生物系统树。本实验所采集的样品来自于胶州湾和海南岛海域，实验采用对沉积物进行hzo和amoA基因文库构建进一步测序分析进化关系的方法。通过建立的系统发育树可以对两个站位的微生物多样性进行评估。本次实验证明胶州湾A5站位hzo基因多样性较少而海南岛海域E505站位amoA基因有较高多样性。关键词：厌氧氨氧化；hzo基因；amoA基因中国石油大学（华东）本科毕业设计（论文）ABSTRACTThebeautiful

3、naturalsceneriesandtheuniqueprocessofgeologicalevolutionofJiaozhouBayandHainanIslandwatersareattractingmoreandmoreChineseandforeignscientists.Thecomplexgeologicalevolutionmaygowithcontinuousevolutionoflivingbeings.Thisstudyanalyzedthearchaealandbacterialdive

4、rsitybytheconstructionofgenesequencesthatcanbeappliedtotheanalysisofspeciesdiversity.Inthisexperiment,sedimentDNAfromJiaozhouBayandHainanIslandcoastalareaswasextracted;hzogenesandamoAgeneswereamplifiedthroughPCRwithdegenerateprimersjustifiedbyformerresearche

5、s,insertedintoplasmids,whichwerethentransformedwithcompetentE.colicells,analyzedbyRFLP,andsequenced.Afterseriesofprocedures,phylogenetictreesbasedonhzoandamoAgeneswereconstructed,whichisagoodindicationofmicrobediversity.Thesedimentsamplesusedinthisstudywerec

6、ollectedfromtheJiaozhouBayandHainanIslandWaters.ThisstudyanalyzedthearchaealandbacterialdiversitybytheconstructionofhzoandamoAgenelibraries.Fromthetwophylogenetictreesconducted,wecanseehzogenesofstaionA5ofJiaozhouBayhaslowdiversitywhileamoAgenesofstationE505

7、ofHainanIslandhashighdiversity.Keywords:Anammox;hzogenes;amoAgenes中国石油大学（华东）本科毕业设计（论文）目录第1章前言11.1胶州湾生态环境11.2厌氧氨氧化细菌11.3该实验涉及的的分子生物学技术31.3.1PCR技术31.3.2限制性酶切61.3.3琼脂糖凝胶电泳71.4本文的研究目的及意义81.4.1本文的研究目的81.4.2本文的研究意义9第2章实验部分102.1材料及仪器102.1.1胶州湾的地理位置及站位来源102.1.2实验药品1

8、02.1.3培养基112.1.4主要仪器设备112.2实验步骤122.2.1宏基因组DNA的提取122.2.2hzo与amoA基因序列的PCR扩增142.2.3PCR产物的乙醇沉淀152.2.4PCR产物纯化162.2.5纯化PCR产物的连接162.2.6感受态细胞的制备162.2.7转化17中国石油大学（华东）本科毕业设计（论文）2.2.8克隆的PCR扩增182.2.9PCR产物酶切