卵巢癌相关抗原ca125胶体金免疫层析检测方法的初步建立

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1、己I吉丁l口糖类抗原125(Carbohy蚴e锄tig饥125，CAl25)是20世纪80年代发现的与卵巢肿瘤的发生、发展密切相关的抗原蛋白物质，是妇科最常用的血清型肿瘤标志物。在CAl25发现初期由于可被单克隆抗体OCl25所识别，因而被定义为一种以单抗编号命名的抗原表位。1984年Ⅺug等以OCl25为基础，建立了放射免疫分析法定量检测人血清CAl25的含量，临床研究显示，在人体内正常范围为0~35U／m“11。研究发现，上皮性卵巢癌发生时，患者血清中CAl25含量会有不同程度升高，且二者的相关性可达到80％左右【21，特别是非粘液性卵巢癌患者会出现血清水平

2、的CAl25异常升高，人体肿瘤的负荷状态与其含量的高低具有正相关性，因此可作为卵巢癌防治的主要监测指标。目前关于CAl25分子结构的研究比较清晰，整个蛋白分子由22152个氨基酸残基构成，其蛋白分子由MUCl6基因编码，此基因定位于染色体19p13．3处，分子量大小在20肛1000l①。CAl25是由超长N端、较短C端胞内区、胞外串联重复序列和胞间跨膜区构成的一种跨膜蛋白。CAl25是一种高度糖基化的粘蛋白，其氨基酸长链中存在大量的潜在糖基化位点，糖链部分可占整个分子质量的20‰70％，因此不同程度的糖基化可形成不同质量的CAl25蛋白分子。研究发现游离CAl2

3、5形成的机制是通过胞内酶切作用使CAl25从细胞膜上脱落并游离于体腔血液当中，正常情况下人体血清中CAl25含量处于极低水平，在卵巢癌患者的癌中组织CAl25表达量明显升高并超过正常水平，且表达量与血清中含量呈正相关。因此监测血清中CAl25含量的高低，对卵巢癌的预防和术后辅助治疗具有及其重要的临床意义。卵巢癌是危害女性生命健康的三大恶性肿瘤之一，其主要特点是初期无典型性116i床症状、多数患者就诊时已是晚期，死亡率位居三大恶性肿瘤之首，因此寻找特异性标志物建立卵巢癌简便、快速的早期诊断方法具有重大意义。目前，CAl25作为最重要的卵巢癌标志物已建立了多种多样的

4、检测方法，从有放射性污染的免疫放射分析法(immlmoradiometric弱say，Ⅱ洲A)到实现半定量的酶联免疫法(EnZyme．LiIll【cdIInml】110SorbentAssay，ELISA)及更精准的化学发光免疫分析(ch锄iluminescenceimmuno弱say'CLn)、时间分辨荧光免疫分析法(TI江认)。这些方法随着检测设备的发展，精度不断的提高；但由于设备限制，仍不能满足基层医院和床旁检测的需求。因此，本研究运用胶体金免疫层析技术建立以35U／『mL为阈值的双抗体夹心法实现快速对血清V中CAl25进行半定量。该方法具有使用成本低、操

5、作简便快速、试剂稳定性好的特点，有望应用于早期卵巢癌的床旁快速筛查和初步诊断。VI符号与缩略语VII目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IAbs仃act⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．III引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯V符号与缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯VII录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．Ⅸ第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1CAl25概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．1CAl25分子结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11。1．2CAl25生物表达特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．3CAl25基因结构与功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1．4CAl25与卵巢癌的相关性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．2CAl25的检测方法及其研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．1放射免疫分

7、析法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．2酶联免疫法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．3化学发光免疫分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．4免疫荧光分析法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．3胶体金免疫层析快速检测技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．3．1胶体金免疫层析技术的研究背景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．3．2胶体金结构特点及技术特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51-3．3胶体金及胶体金标记⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯71．3．4胶体金免