骨桥蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达及其中和抗体对肝脏病理改变的影响

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1、分类号VDC博士学位论文密级骨桥蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达及其中和抗体对肝脏病理改变的影响一‘●●』J●●一■●ExDressions0l0Ste0D0nnnlnJ础给幻．SD刀Z口iaponic州nfeI',tedmiceliverand—cacy“itsiaponicnlectedelIlcacyOIitS跖刀2叫erl●●』．1'●l●·●neutralizingantiDodyagainstSChistosomiasishepatopathoIogicchanges作者姓名：陈柏

2、林学科专业：内科学学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期』≯V≯湘雅医院消化内科张桂英教授答辩委员会主席中南大学二零一二年五月一令一一，牛血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：丝年』月丛学位论文版权使用授权书本人了解

3、中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储繇雠翩签名蚴期：毖工蜴助。本课题由国家自然科学基金(No．81072038／111617)资ThisobjectwassupportedbyGrantsfromtheNation

4、alNaturalScienceFoundationofChina(No．81072038／H1617)．博士学位论文中文摘要摘要研究背景：日本血吸虫病在我国的防治形势仍然严峻，其导致的肝纤维化在有效杀虫治疗之后仍会发展并引起多种严重并发症。迄今为止仍未发现防止或逆转血吸虫病肝纤维化的可靠方法，亟需对血吸虫病肝损伤机制进一步研究以寻找新的治疗靶点。骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一个功能复杂的磷酸化糖蛋白，近期研究发现其在脂肪性肝炎、中毒性肝炎等炎症性肝病中起着趋化因子、促炎因子和免疫

5、调节因子等作用。本研究将通过观察OPN在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达规律，分析其与肝脏病理改变及多种促纤因子的相关性，并比较血吸虫病肝损伤在特异性OPN中和抗体干预后的变化情况，以进一步探讨血吸虫病肝损伤机制，为临床血吸虫病的防治工作提供实验及理论依据。第一章日本血吸虫病肝损伤小鼠模型的构建及评价目的：构建稳定的类似人类日本血吸虫病自然病程的小鼠模型，观察评价血吸虫病肝损伤病理改变的动态进程，为随后探讨OPN在血吸虫病肝损伤中的表达规律和作用机制及药物干预的时机选择和疗效观察提供依据。方法：

6、以滴有含日本血吸虫尾蚴(15+1条／只)的去氯水的玻片覆盖于小鼠腹部20rain形成急性感染，感染后每日收集小鼠粪便进行涂片并在显微镜下观察，将首次在粪便中发现血吸虫虫卵的日期视为血吸虫肝病的发病起始，自即日起及之后每隔2周随机处死小鼠直至12周，取小鼠肝脏行HE染色和Masson染色观察并评价肝脏病理改变。结果：感染后第42天首次在小鼠粪便中发现血吸虫虫卵：HE染色显示感染后第6周肝脏出现虫卵沉积和虫卵肉芽肿，第10周急性肉芽肿T博士学位论文中文摘要性炎达高峰，第14周炎症细胞消散，成纤维细胞出

7、现，慢性肉芽肿形成，第18周虫卵肉芽肿开始崩解；Masson染色显示感染后第6周虫卵周围出现胶原纤维，第10周胶原沉积达高峰，出现典型的肝纤维化病理改变，第14周后纤维化程度逐渐减轻而趋于稳定。实验显示日本血吸虫小鼠感染成功率和完成实验的小鼠建模成功率均为100％。结论：日本血吸虫尾蚴腹部敷贴感染法成功构建了稳定的类似人类日本血吸虫病自然病程的小鼠模型；日本血吸虫病肝损伤主要体现在急性肉芽肿性炎症和胶原纤维沉积即肝纤维化两方面。关键词日本血吸虫，肉芽肿，肝纤维化第二章OPN表达与日本血吸虫感染小鼠

8、肝脏病理改变的关系目的：探讨OPN在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达规律及其与肝脏病理改变的关系。方法：100只BALB／C小鼠随机分为对照组(门=50)和模型组(以=50)，模型组以日本血吸虫尾蚴腹部敷贴感染法建模，对照组以不含尾蚴的去氯水代替含尾蚴液处理。分别于造模后第6、8、10、14和18周每组随机处死lO只小鼠并取肝脏组织，行HE和Masson染色观察并评价肝脏病理改变，采用免疫组化法、RT-PCR和Westernblotting检测OPN蛋白和mRNA表达，采用免疫组化法