间充质干细胞条件培养基对新生大鼠缺氧缺血脑损伤移植神经干细胞凋亡的影响

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1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文«中国图书资料分类法»分类号：R72单位代码：10660学号：S090242贵阳医学院2012届硕士学位论文间充质干细胞条件培养基对新生大鼠缺氧缺血脑损伤移植神经干细胞凋亡的影响研究生：张艳莎导师：栾佐教授何志旭教授年级：2009级专业：儿科学2012年5月22日1贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„9结果„„„„„„„„„„„„„„18讨论„„„„„„„„„„„„„„28结论„„„„„„„„„„„„„„31参考文献„„„„„„„„„„„

2、„„32英文摘要„„„„„„„„„„„„„37致谢„„„„„„„„„„„„„„38略缩词表„„„„„„„„„„„„„39论文原创性声明„„„„„„„„„„40附：综述„„„„„„„„„„„„412贵阳医学院2012届硕士研究生论文间充质干细胞条件培养基对新生大鼠缺氧缺血脑损伤移植神经干细胞凋亡的影响专业名称：儿科学；研究生：张艳莎；导师：栾佐教授何志旭教授摘要目的研究来源于人脂肪组织培养的间充质干细胞条件培养基对新生大鼠缺氧缺血脑损伤移植神经干细胞凋亡的影响。方法新生SD大鼠海马神经干细胞培养至2-3代，DAPI标记后用于移植。7日龄SD大鼠根据Rice法进行改进，制作缺氧

3、缺血脑损伤模型。模型随机分为四组：模型组（Ⅰ）、移植组（Ⅱ）、因子联合细胞移植组（Ⅲ）及胰岛素生长因子-1（IGF-1）抗体中和的因子联合细胞移植组（Ⅳ）。建模后24小时，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别行右侧颈总静脉注射等体积50μl生理盐水、脂肪间充质干细胞条件培养基、含过量抗IGF-1抗体的脂肪间充质干细胞条件培养基；静脉注射止血后，三组均于左侧海马进行神经干细胞移植。Ⅰ为空白对照组，不采取任何注射和移植。分别于移植后1、2天，称量模型大鼠体重，对脑组织进行冰冻切片并行TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果四组模型大鼠体重无统计学差异；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组脑组织外源性神经干细胞凋亡数，于移植后2

4、4h差异无统计学意义，移植后48h差异具有统计学意义且组间差异均有统计学意义。结论神经干细胞移植对于HIE模型动物生命质量短期无影响，间充质干细胞条件培养基可以改善新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型移植的神经干细胞存活，降低其凋亡。关键词脂肪间充质干细胞条件培养基神经干细胞移植凋亡基金项目:国家科技部国际合作研究项目(编号2012DFA30880)3贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemicencephalopathy,HIE）是一种引起儿童长期神经系统缺陷的常见的原因。围产期窒息是本症的主要病因。凡是造成母体和胎儿间血液循环和气体

5、交换障碍使血氧浓度降低者均可造成窒息。脑在缺氧情况下可引起以下四种变化：能量代谢障碍脑组织酵解增加引起代谢性酸中毒；通气功能障碍二氧化碳贮留产生呼吸性酸中毒；能量产生减少引起大量神经元坏死及钠泵转运障碍引起细胞内水肿；脑微血管缺氧及血流减少，引起脑缺血，并引起血管通透性增高产生血管源性脑水肿，进一步造成脑缺血，继之发生脑坏死。其病理基础是缺氧性脑病，基本病理改变是脑水肿和脑坏死。缺氧主要引起脑水肿及神经元坏死。而缺血主要引起脑血管梗塞及白质软化。目前认为有五种基本类型的病理改变：脑水肿，选择性神经元坏死，基底神经节大理石样变性，大脑矢状旁区神经元损伤及脑室周围白质软化。HI

6、E的临床症状以意识状态、肌张力变化和惊厥最重要，是区别脑病严重程度和后遗症的主要指标。HIE活婴[1]发病率为2.5/1000，HIE窒息患儿在新生儿期死亡，存活患儿中25%患有永久[2]性神经系统障碍：如脑瘫、智力障碍、学习困难或癫痫。这些慢性期缺陷不能通过常规的治疗修复。HIE急性期治疗目前临床以三支持、三对症为主：即维持良好的通气、换气功能，使血气和PH值维持在正常范围；维持周身和各脏器足够的血液灌流，使心率和血压保持在正常范围；维持血糖在正常范围；控制惊厥，[3]降低颅内压，消除脑干症状。国内研究报道：1，6-二磷酸果糖、苯巴比妥和[4][5][6][7]纳洛酮联合

7、应用、促红细胞生成素、神经节苷脂、鼠神经生长因子、高[8]压氧等应用于HIE急性期治疗证明有一定疗效。近年来，干细胞/前体细胞移植应用于HIE动物模型的治疗已经被证实有效。如神经干细胞/前体细胞，间充质干细胞，骨髓及脐带血细胞等显示有治疗的潜能。神经干细胞（neuralstemcells,NSCs）是一种来源于中枢神经系统的具有自我更新和多向分化潜能的未成熟的前体细胞，可在大脑发育的不同区域分离获得，在成年大脑亦能获得。体外培养的NSCs保持未分化状态，在表皮生长因子（epidermalgrowthfactor,E