牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及发病机理的研究

《牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及发病机理的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河南农业大学硕士学位论文牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及发病机理的研究姓名：秦佳晨申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：王新庄201205河南农业大学硕士学位论文摘要子宫内膜炎是引起母牛不孕症的主要疾病之一，该病主要是由于分娩时或产后子宫内病原微生物的感染引起。据统计由子宫内膜炎引起的不孕症占疾病性不孕的60％～70％。在国外有资料表明。奶牛子宫内膜炎的发病率在30～40％左右。我国奶牛子宫内膜炎的发病率约为20"50％左右。母牛发生子宫内膜炎后可使产犊间期延长、产奶量下降、死淘率增加、治疗费用增加及治疗期间奶源的

2、废弃。然而子宫内膜炎患病牛在不同的地区从子宫内容物中所分离的病原菌种类及各种细菌所占的比例不尽相同。本研究对平顶山地区某奶牛场子宫内膜炎患病牛和郏县红牛子宫内容物中的细菌进行分离鉴定、药物敏感性试验和昆明小鼠的致病性试验：根据样品中细菌分离率的高低、细菌的耐药情况并结合致病性试验结果共选择5株细菌进行昆明小鼠子宫内膜炎病例模型的复制；通过小鼠子宫组织的病理切片和透射电镜观察子宫组织及其组织中细胞的损伤情况来揭示子宫内膜炎的发病机理。1、郏县红牛及奶牛子宫内膜炎患病牛子宫内容物中细菌的分离与鉴定：通过对某奶牛场确诊的29

3、头临床型子宫内膜炎患病牛子宫内容物进行分离培养、纯化、鉴定，结果共分离出细菌18种(52株)。其中以蜡样芽孢杆菌、奥斯陆莫拉菌、大肠埃希菌、链球菌、苏云金芽孢杆菌为主。同时，我们对没有子宫内膜炎临床症状的21头郏县红牛进行子宫内容物样品的采集，并对其进行分离、纯化、鉴定。结果共分离出细菌14种(43株)，其中以蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、产吲哚金黄杆菌、浅黄金色单胞菌、奥斯陆莫拉菌等为主。在所分离的14种细菌中有10种细菌均与奶牛子宫内膜炎患病牛所分离到的病原菌相一致。此外，从郏县红牛子宫内容物中所分离细菌的革兰氏染色结

4、果来看，革兰氏阳性菌有23株(占53．5％)，革兰氏阴性菌有20株(占46．5％)，两者均与奶牛子宫内膜炎患牛相一致。2、药物敏感性试验：为了研究所分离细菌对药物的敏感程度，在常用的各类药物中选择了24种药物的标准品，采用微量肉汤稀释法，测得了所分离细菌对24种药物的敏感性。在奶牛样品中所分离的18种细菌对环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考及氯霉素均较为敏感。表皮葡萄球菌对四环素、土霉素、金霉素产生了耐药性而对多西环素仍具有敏感性说明该细菌对四环素类药物还未产生完全交叉耐药性。所有细菌对阿莫西林、氨苄西林均产生了较高的耐药性

5、。甚至大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、玫瑰色库克菌、棒状杆菌属、脑膜脓毒性金黄杆菌对B一内酰胺酶抑制剂(克拉维酸)均产生了耐药性。在郏县红牛样品中所分离的14种细菌对环丙沙星、恩诺沙星、四环素、多西环素、氯霉素、氟本尼考、替米考星均较为敏感，所有细菌除乳房链球菌(为中介)外均对阿莫西林、氨苄西林存在较高的耐药。3、致病性试验：针对奶牛子宫内膜炎患病牛和郏县红牛子宫内容物中所分离的细菌进行了致病性试验。采集细菌的新鲜纯培养物0．5mL接种于昆明小鼠腹腔中，观察并记录小鼠的发病致死情况。结果显示：在郏县红牛样品中所分离的蜡样芽孢

6、杆菌、滕黄微球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌和奶牛样品中所分离的大肠埃希菌、脑膜脓毒性金黄杆菌、停乳链球菌、1河南农业大学硕士学位论文苏云金芽孢杆菌、产吲哚金黄杆菌等，在腹腔攻毒后2d内均可使昆明小鼠致死，特别是郏县红牛样品中的大肠埃希菌在腹腔攻毒后2～3h即可使昆明小鼠致死。4、昆明小鼠子宫内膜炎病例模型的建立：根据样品中细菌分离率的高低、细菌的耐药性情况以及致病性的强弱共选择5株细菌建立昆明小鼠子宫内膜炎病例模型。在子宫内接种细菌3d后将试验组小鼠处死，取子宫进行细菌分离，结果表明：各模型组从子宫内分离到所接种的细菌

7、，同时在脾脏、肝脏中也可分离到所接种的细菌；生理盐水对照组和空白对照组均未分离到细菌。子宫组织病理切片和电镜观察表明：①各造模组小鼠肛染色结果显示子宫黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落，毛细血管充血，子宫内膜及子宫肌层有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润，以及部分造模组肌纤维排紊乱、松散、肌肉的断裂。②各造模组小鼠子宫组织的超微结构观察表明多数细胞中均可见到胞质内有大量空泡状结构、细胞核膜与细胞质出现裂隙、细胞核内的空泡以及凋亡小体的出现。③生理盐水对照组和空白对照组腿染色结果观察和透射电镜的超微结构观察结果显示子宫组织各层结构均

8、接近正常，组织中的细胞结构也保持较好的完整性。根据以上试验结果可以初步判断郏县红牛样品中的蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌和奶牛子宫内膜炎患病牛样品中蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌和表皮葡萄球菌均可引起昆明小鼠急性子宫内膜炎。昆明小鼠子宫内膜炎稳定的模型以及模型在临床上的治疗试验等后续工作仍需进一步的研究。关键词：郏县红牛；奶牛；子宫内膜炎；分