南方红豆杉聚戊烯醇分离纯化与抗肝纤维化作用的研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：寺貔签字日期：知f≯年∥月叫日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝’江盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿态鲎可以将学位论文的全

2、部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：0仓．霓L导师签名：签字日期：加I2，年Z月纠日气张嗲签字日期：∞I乒年6月刁日浙江大学博士学位论文摘要摘要中药材资源的综合利用对中药行业的可持续发展起着举足轻重的作用。以有限的资源创造最大的价值，是保护中药材资源的重要内容。南方红豆杉(TaxusChinensisvar．mairei)是提取紫杉醇及其前体物质的重要原料，由于针叶内此类物质含量低导致在生产过程中产生大量的废弃物。而南方红豆杉针叶中及生产紫衫醇类

3、化合物产生的废弃物中富含聚戊烯醇类化合物，这为红豆杉针叶资源的综合利用开辟了新的途径。本文对南方红豆杉针叶中的聚戊烯醇化合物进行了提取分离、检测、组分分析、含量变化、纯化制备、结构鉴定、以及抗肝纤维化活性等一系列研究，旨在为南方红豆杉针叶资源的综合利用和可持续发展提供理论依据，同时为其他中药材资源的合理利用提供借鉴。主要研究结果如下：(1)采用索氏提取方法提取南方红豆杉针叶中的聚戊烯醇类化合物，建立了聚戊烯醇的高效液相色谱和液质联用等分析方法。HPLC具体分析参数为：XBridgeRPC18(5lain，4．6llllll×250删岫；柱温40℃：流速：

4、1．5mL／mim进样量：10此：紫外检测波长：210nnl。流动相：甲醇(A)和异丙醇(B)，梯度洗脱：0-5min，40％B；5—35min，40％_75％B：36min，40％B：50min，40％B。结果表明，南方红豆杉聚戊烯醇(Taxuspolyprenols，TPs)共有l1个同系物，并呈双家族分布特征。(2)利用上述方法分析了不同月份南方红豆杉当年生针叶中TPs的含量结果表明，不同年龄植株针叶中TPs的含量变化趋势基本一致，即自生长初期开始积累至10-11月份达到最高(42．43rag／g)，当气温降低含量下降，待次年4月份又有回升趋势，说

5、明植株内TPs可能与温度存在～定的相关关系。不同年龄植株同一时间的TPs含量也有所差异，这可能是微环境不同所致。此外，初步研究表明光照强度对叶片内TPs含量有一定影响，高光强有利于聚戊烯醇类物质的积累。(3)对南方红豆杉聚戊烯醇的规模化分离纯化制备工艺进行了系列研究，以期为南方红豆杉聚戊烯醇的广泛应用提供技术基础。以索氏提取法制备TPs粗提物浸膏，通过丙酮冷析、水解、硅胶柱色谱等除杂方法对TPs的纯化工艺进行了探索，工艺如下：粗提物制备参数：800g南方红豆杉针叶原料，80。C索氏提取12h。水解参数：样品，石油醚提取物100g：转速，240rpm／mi

6、n；水解液，浙江大学博士学位论文摘要5％NaOH甲醇溶液(含0．05％焦没食子酸)；水解温度60"C；水解时间：8h。丙酮冷析参数：4-5℃，4h或室温下24h。硅胶柱层析参数：上样量1：30，洗脱液石油醚和乙酸乙酯(19：1，v／v)，洗脱流速30mL／min。根据以上参数制备聚戊烯醇得率约为0．6％。按照以上流程及工艺参数制备TPs(>85％，HPLC测定1用作抗肝纤维化活性研究。此外，探索了HSCCC分离纯化TPs的前期工艺条件，为聚戊烯醇分离纯化提供新的方法。(4)在硅胶柱色谱分离纯化的基础上，进一步采用制备型HPLC分离纯化聚戊烯醇单体，并借助

7、uV、IR、1HNMR和”CNMR等常规波谱手段对其进行了结构鉴定，结合液质联用分析结果表明TPs包含的同系物分别为polyprenol-14-polyprenol-24，结构类型为桦木醇型聚戊烯醇。(5)动物实验表明TPs具有一定的抗肝纤维化作用，能够缓解由CCl4诱导SD大鼠的肝纤维化进程。结果表明，TPs能够显著提高机体抗氧化能力、抑制肝星状细胞活化、下调促肝纤维化细胞因子和保护肝细胞等，其抗纤维化作用可能通过抑制TGFl3／Samd2／3信号通路来实现。此外，细胞实验表明TPs的保肝作用可能与体内代谢物多萜醇有关，有待进一步研究。关键词：南方红豆

8、杉；聚戊烯醇；结构鉴定；分离制备；高速逆流色谱；抗肝纤维化Il浙江大学博士学位论