吡那地尔后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文吡那地尔后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究姓名：魏义勇申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：喻田；刘兴奎201205遵文医学院硕士学位论文吡那地糸后处理在大鼠心肌线箍体比接蛋白质组学的研究吡那地尔后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究中文摘要目的：建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观察吡那地后处理对缺血再灌注损伤大鼠心脏功能的影响。运用蛋白质组学研究方法，探讨吡那地尔后处理对大鼠心肌线粒体蛋白质的表达变化。方法：1．建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。18只成年雄性S

2、D大鼠随机分为正常组(Nor)、缺血再灌注损伤组(Con)和吡那地尔后处理组(Pina)，每组6只。灌注方案：Nor组：持续灌注Kerbs．Henseleit缓冲液(K．H液)120min，无缺血再灌注损伤。Con组和Pina组：缺血前先灌注K．H液平衡20min，灌注4。CST．Thomas停跳液，使全心缺血40min后，按以下方案灌注：①Con组：灌注K．H液60min；@Pina组：灌注K·H液前给予50panol／L吡那地尔2min，继之K．H液58min。观察各组平衡末及灌注末心率(HR)、左室发展压(LVDP)

3、、左室舒张末压(LVDEP)、以及最大dp／dt等心功能的变化。2．差速离心和Nycodenz密度梯度离心分离纯化大鼠心肌线粒体，Westernblot验证其纯度。3．提取线粒体蛋白质，采用双向电泳技术(2-DE)对蛋白质进行分离，利用PDQuest8．0软件分析各组蛋白质表达的差异。选取差异在2倍以上的蛋白质点，采用MALDI．TOF．MS鉴定。4．Westernblot法回复验证部分差异蛋白质的表达变化，证实双向电泳结果的可靠性。结果：1．平衡末各组间心功能无明显差异，续灌末Nor组和Pina组心功能明显优于遵叉蜃学院

4、硕士学位论文吡那地尔后处理在文冀心肌线矗体比餐蛋白质组学的研究Con组(P<0．05)；2．Westernblot证实了Nycodenz密度梯度离心法提取的线粒体富集程度较高；3．对各组线粒体蛋白进行2-DE，每张胶上检测出480±22个蛋白质斑点；PDQuest8．0软件分析后得到11个差异蛋白质，经MALDI．TOF．MS分析，均成功鉴定；4．Nor组与Con组比较发现：NADH脱氢酶铁硫蛋白2(NDUFS2)表达升高，ATP合酶0【亚单位(ATPA)、电子传递黄素蛋白。【亚单基(ETFA)和细胞色素c1亚基2表达降低

5、。Pina组与Con组比较发现：NDUFS2、NADH脱氢酶110口亚基(NDUFAl0)和NADH脱氢酶黄素蛋白2亚基(NDUFV2)表达升高。异柠檬酸脱氢酶仅亚基(1DHA)和Delta(3，5)．Delta(2，4)．dienoyl辅酶A异构酶(ECHI)表达降低。有两个蛋白质点被鉴定为ATP合酶d亚基，一个蛋白点表达升高，而另一个蛋白点表达降低。5．回复验证：据质谱结果，检测NDUFS2、ATPA和NDUFAl0在各组的表达变化。Nor组ATPA的表达高于Con组(P<0．05)，而NDUFS2表达低于Con组(J

6、P<0．05)；Con组NDUFS2和NDUFAl0的表达高于Pina组(JP<0．05)。这些蛋白质的表达变化与2-DE结果一致。结论：1．吡那地尔后处理能减轻心肌缺血／再灌注损伤，有保护缺血心肌、改善心功能的作用；2．(1)p比那地尔后处理降低了NDUFS2、NDUFAl0和NDUFV2的代偿性升高，这种变化可能与mitoKATPc开放心肌保护作用机制有关，它们可能是mitoK^"c开放心肌保护作用的靶蛋白；(2)吡那地尔后处理可引起ATP合酶d亚基发生磷酸化，这种修饰可能参与了mitoK^皿C开放的心肌保护作用机制；

7、(3)吡那地尔后处理可促进IDHA和ECHl表达：(4)ATPA、ETFA和细胞色素C1亚基2可能是心肌损伤的标识蛋白，而NDUFS2可能是心肌损伤的保护蛋白；3．Nycodenz不连续密度梯度离心法可获得较高纯度的心肌线粒体。关键词：心肌缺血再灌注损伤；吡那地尔后处理；线粒体；蛋白质组学；2-DE4PinacidilPostconditioningMayChangeExpressionLevelsofObjective：MyocardialMitochondrialProteomeAbstractConstructing

8、ratischemia／reperfusioninjury(IRI)modeltoinvestigatetheprotectiveeffectofpostconditioningonischemicratmyocardiumwhichsufferedIRI．Thepresentstudy,drawing