阻断吡娜地尔后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究

《阻断吡娜地尔后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、遵义医学院硕士学位论文阻断吡娜地尔后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究姓名：李科申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：喻田；刘兴奎20120521遵义匿学院硕士学位论文阻断吡那地糸后处理文鼠心肌线粒体比较蛋鲤质鲤塑堕窭阻断吡那地尔后处理大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究中文摘要目的：建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观察5．羟葵酸阻断吡那地尔后处理对缺血再灌注损伤大鼠心脏功能的影响，利用蛋白组学研究技术观察心肌线粒体蛋白质表达的变化。方法：1．建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型：将24只雄性sD大鼠随机分为正常组(Nor)、缺血再灌注损伤组(I瓜)、吡那地

2、尔后处理组(Pina)、5．羟葵酸阻断吡那地尔后处理组(5一HD+Pina)，每组8只；各组灌注方案：Nor组：持续灌注Kerbs．Henseleit缓冲液(K-H液)120min，无缺血再灌注损伤。I瓜组、Pina组、5-HD+Pina组，缺血前灌注K-H液平衡20min后，灌注4。CST．Thomas停跳液，使全心停跳缺血40min，分别按以下方案续灌：I／R组：灌注K-H液60min；Pina组：灌注K．H液前给予50pmol／L吡那地尔2min，继之K—H液58min；5-HD+Pina组：依次灌注100gmol／L5．羟葵酸3min、50gmol／L吡那地尔2min、K-

3、H液55min。记录各组平衡末和续灌末心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVDEP)、以及最大dp／dt等心功能的变化，并收集心室肌组织；2．差速离心及Nycodell_z密度梯度离心提取、纯化大鼠心肌线粒体，并利用Westernblot检测亚细胞器标识物以验证其纯度；3．Pina组与5-HD+Pina组心肌线粒体蛋白行双向凝胶电泳(2．DE)、染色、凝胶扫描后获得2-DE图像，以PD．Quest8．0软件分析各组差异表达蛋白点，并将各蛋白点挖取、酶解、质谱分析后获得差异蛋白的谱图；4．利用Westernblot回复验证关键差异蛋白的表达趋势，以判断2-DE结果的

4、可靠性。结果：1．利用Nycodenz密度梯度离心法进一步的提高了线粒体的纯度；2．平衡末各组间心功能无明显差异，灌注末Nor组及Pina组的心功能明显好于I／R组和5-HD+Pina组(P<0．05)，5-HD+Pina组与UR组间心功能差异无统计学意义；3．两组蛋白进行2-DE，得到聚焦良好、相似性高的图像，在两组胶上平均检测出485+22个蛋白斑点；经分析后得到9个差异大于2倍以上的蛋白点，质谱分析成功获得一2一遵义医学院硕士学位论文阻蝴地铂处哩叁墨坚坠燮坐塾鲎鱼堕丝鲎竺塑窒差异蛋白谱图；4．通过分析，与Pina组比较在5-HD+Pina组表达下降的分别为：Spot5202、

5、5205(NADH脱氢酶1旺亚复合物10亚基，NDUFAl0)，Spot6001(ATP合酶O【亚基，ATPA)；表达升高的6个蛋白分别为：Spot2404(长链脂酰辅酶A脱氢酶，ACADL)，Spot5301(NADH脱氢酶1a亚复合物10亚基，NDUFAl0)，Spot5402(NADH脱氢酶铁．硫蛋白2，NDUFS2)，Spot5503(乙醛脱氢酶2，ALDH2)，Spot6603(二氢硫辛酰胺转乙酰酶，丙酮酸脱氢酶复合体的组成部分，ODP2)，Spot6807(线粒体内膜蛋白，IMMT)。其中Spot5202、5205、5301经质谱鉴定均为NDUFAl0，两个表达下调，一

6、个表达升高。5．Westernblo回复验证，在5-HD+Pina组中NDUFAl0、NDUFS2及ALDH2较Pina组升高，ATPA较Pina组下降，其差异有统计学意义俨<0．05)。结论：1．吡那地尔后处理能明显改善大鼠心脏功能，而5．羟葵酸可部分拮抗其保护作用；2．5．羟葵酸阻断吡那地尔后处理(线粒体敏感性K+通道的开放被阻断)，可导致：①心肌细胞发生缺血再灌注损伤引起ATPA表达下调，其原因可能是ATPA的转运尤其是跨膜过程受损；Pina可以维持线粒体内ATPA的稳定表达；②ACADL、NDUFS2、ODP2、IMMT、ALDH2表达上调；可能是由于线粒体内H+增加、pH

7、升高、ATP合成减少、醛类物质堆积等原因，促使这些蛋白质发生了代偿性的升高；③心肌缺血再灌注损伤可影响NDUFAl0的表达，期间NDUFAl0可能发生了剪切或修饰；就以上蛋白质变化与mitoKAllP之间的确切关系，尚待进一步深入研究。3．差速离心后再利用Nycodenz不连续密度梯度法离心，可获取较高纯度的心肌线粒体。关键词：5．羟葵酸；吡那地尔；后处理；线粒体；蛋白质组学；双向电泳；心肌——j一遵义医学院硕士学位论文阻断吡那地尔后处理大鼠心肌线舷体比较蛋白质组学的