p-v杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究

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1、目录英文缩略词表…………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………4正文P-V杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究………71前言…………………………………………………………………72材料与方法…………………………………………………………83结果…………………………………………………………………204讨论…………………………………………………………………295结论…………………………………………………………………33参考文

2、献……………………………………………………………34综述金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素的研究进展……………………………………………………………38参考文献……………………………………………………………43安徽医科大学硕士学位论文英文缩略词对照表英文简写英文全称中文全称耐甲氧西林金黄色MRSAMethicillin-resistantstaphylococcusaureus葡萄球菌Community-associatedmethicillin-resistantCA-MRSA社区获得MRSAstaphy

3、lococcusaureusPVLPanton-ValentineleukocidinP-V杀白细胞毒素NF-κBNuclearfactor-kappaB核转录因子-κBIL-6Interleukin-6白介素-6IL-8Interleukin-8白介素-8IL-10Interleukin-10白介素-10TNF-αTumornecrosisfactor-α肿瘤坏死因子αDABDiaminobenzidine二氨基联苯胺PMNsPolymorphonuclearleukocytes多形核粒细胞ELISAEnzyme-linke

4、dimmunosorbentassay酶联免疫吸附实验BALFBronchoalveolarlavagefluid支气管肺泡灌洗液PBSPhosphateBuffer磷酸盐缓冲液HEHematoxylin-eosin苏木精-伊红染色kDaKilo-dalton千道尔顿LBLuria-BertanimediumLB培养基ODopticaldensity光密度DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DHR123Dihydrorhodamine123二氢罗得明123Sodiumdodecylsulphatepolyacr

5、ylamidegel十二烷基磺酸钠-聚SDS-PAGEelectrophoresis丙烯酰胺电泳1安徽医科大学硕士学位论文中文摘要P-V杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究目的：金黄色葡萄球菌是引起人类各种感染性疾病的重要病原菌，携带P-V杀白细胞素(Panton-Valentineleukocidin,PVL)基因的金葡菌致病性增强，分布更广，可引起社区人群的严重感染。大量临床流行病学资料都强烈提示，PVL是金黄色葡萄球菌所致坏死性感染的重要毒力因素，但其致病机制尚不清楚。本课题通过体内试验观察重组PVL（rPVL）引起兔肺炎

6、性损伤的变化，探讨多形核粒细胞(PMNs)、核转录因子-κB（NF-κB）和细胞因子在肺炎症性损伤中的作用，为阐释PVL的致病机制，寻求PVL相关肺炎症性损伤治疗方法提供新思路。方法：（1）动物模型的建立：取45只新西兰大白兔随机分为3组，分别为正常对照组、rPVL组和VCR+rPVL组（实验前用长春新碱预处理），每组15只。正常对照组使用PBS灌肺，其它两组均用rPVL灌肺。（2）BALF中PMNs计数、凋亡/坏死、ROS、LDH和LPI检测：造模后9h，采集支气管肺泡灌洗液（BALF），计数BALF中PMNs，流式细胞术（

7、FCM）检测BALF中PMNs的凋亡/坏死率和活性氧（ROS）自由基释放量，比色法检测BALF上清中乳酸脱氢酶（LDH）含量，BCA法检测肺通透指数（LPI）。（3）肺组织湿干比及病理检测：造模后9h，收集肺组织检测湿重/干重比，并进行苏木精-伊红（HE）染色。（4）肺组织细胞因子和NF-κB检测：分别于造模后3h、6h和9h收集肺组织，每个时间段5只，ELISA方法检测肺组织匀浆上清中IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10含量变化，免疫组织化学和Westernblotting方法检测肺组织NF-κBp65蛋白的表达。结果

8、：（1）与正常对照组比较，rPVL组BALF中PMNs数量显著增高，为(3.0166±0.02)×10/mlvs（0.57±0.01)×10/ml；BALF中PMNs以晚期凋亡为主，晚期凋亡率显著增高，为（63.56±3.53）%vs（0.95±0.33）%；PMNs释放RO