nf-κb在孕鼠深静脉血栓血管内皮细胞中的表达及其抑制剂的干预作用

《nf-κb在孕鼠深静脉血栓血管内皮细胞中的表达及其抑制剂的干预作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2009级硕士学位论文NF．KB在孕鼠深静脉血栓血管内皮细胞中的表达及其抑制剂的干预作用TheexpressionofNF-gBandtheinterventionofNF．．gBinhibitorsonendothelialcellsofpregnantratswithdeepvenousthrombosis课题来源：自选课题专业名称学位申请入指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员妇产科学叶柳青钟梅教授张建平教授陈敦金教授余艳红教授全松教授高云飞副教授论文评阅人肖小敏教授高云飞副教授2012年5月18日广州硕士学位论文NF．KB在孕

2、鼠深静脉血栓血管内皮细胞中的表达及其抑制剂的干预作用硕士研究生：叶柳青指导老师：钟梅教授摘要【研究背景与目的】深静脉血栓(deepveinthrombosis，DVT)是一种常见的血管血栓性疾病，DVT的急性期容易导致肺栓塞，存在致死性，越来越受到国内外学者的重视。英国学者统计妊娠期DVT发病率为0．05％'-'0．10％，近年来妊娠期和产褥期深静脉血栓的发病率呈上升趋势。妊娠期由于生理性获得性易栓因素的存在和血液高凝状态是导致其发病率增高的重要原因。目前公认Virchow提出血流滞缓、血液高凝、静脉壁的损伤是静脉血栓形成的三大因素。近年来研究

3、发现炎症与深静脉血栓的形成和发展有着密切关系，炎症反应介导血管内皮细胞损伤，血流淤滞，从而促进静脉血栓形成；血栓的形成加剧炎症反应，两者相互影响。已有大量的病理学和血清炎症与静脉血栓的相互关系提供有力的依据。因此研究静脉血栓发生、发展相关的调控炎症因子的蛋白对于延缓、减轻静脉血栓形成及预后的判断具有重要的意义。核转录因子(nuclearfactor-kappaB，NF．1cB)是由Sen和Baltimore发现以能与B细胞免疫球蛋白，c轻链基因的增强子rJ3序列(GGGACl]盯CC)特异结合而命名。NF．r,B是近年来发现重要的转录因子，是细

4、胞中普遍存在的具有多向转录调节作用的序列特异性DNA结合蛋白。NF．r,B通常与抑制蛋白(IKB)结合成三聚体，以失活状态存在于细胞浆中，当细胞受到各种刺激原如紫外辐射、细胞因子、活性氧作用时，NF．uB与Iu．B解离并进入细胞核结合靶基因启动子摘要以激动相应基因的转录。目前已在淋巴细胞激活、败血症、急性炎症反应综合征(AIRS)、肝脏缺血再灌注损伤、肿瘤血管新生方面等疾病中发现NF．r,B蛋白的作用。越来越多研究表明在炎症反应复杂的细胞因子网络中，NF．KB的激活可能是一个中心环节。NF．r．B在炎症细胞激活的信号调控中起着重要作用，通过活化

5、中性粒细胞、内皮细胞，使细胞释放一系列粘附分子、细胞因子、酶类等介质，介导或直接参与白细胞和血管内皮细胞的相互作用以及组织的损伤。NF-r,B控制着炎症及免疫相关基因的表达，这些基因涉及到中毒性休克、急性期反应、辐射损伤、哮喘、风湿性关节炎、动脉粥样硬化、癌症等多种疾病过程，因此可以通过抑制NF．rd3转录活性来治疗这些疾病。吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)作为NF．r,B特异性的抑制剂，理论上可减少NF．r．B的核移位进而抑制NF．r,B的活化。基于这种思路，探讨NF．rd3在静脉血栓发生发展阶段中表达的量化特点及变化规律的研究，是否可通过

6、抑制其活性及相应细胞因子的分泌，改善炎症反应，从而影响血栓的形成。探讨NF．r．B激活的信号通路能否作为新型药物靶点的研究方向，为防治深静脉血栓提供初步的理论依据。因此，本实验采用下腔静脉结扎法建立孕鼠深静脉血栓模型，进一步从量化水平探讨深静脉血栓形成后血管内皮细胞中NF．1cB蛋白的表达特点，初步分析NF．rd3蛋白与深静脉血栓发生发展的关系；分析NF．r,B蛋白的表达水平与血栓形成情况的相关关系。本实验使用NF-r,B的抑制剂PDTC干预孕鼠，再探讨其干预作用对NF．r．B蛋白的表达及形成血栓的大小有何影响。【材料与方法】l、54只SD大鼠

7、购自南方医科大学实验动物中心，常规饲养一周后，以2：1雌性与雄性SD大鼠合笼，各组大鼠孕10．15天行DVT造模，其中48只随机分为血栓模型组、PDTC干预组，根据6h、12h、24h、72h时间点随机分为四个亚组，各点为6只，其余6只为假手术组。2、采用下腔静脉结扎法建立孕鼠深静脉血栓模型，血栓模型组和PDTC干Ⅱ硕士学位论文预组在造模前Ih分别给予腹腔注射O．9％生理盐水和PDTC(100mg／kg／d)，每24h注射1次，72h即注射3次。3、分别在建模后规定的各时间点分批处死动物，称取形成血栓的湿重和测量其长度，比较两组血栓形成情况。静

8、脉血栓组织放至10％中性福尔马林液中固定以备HE染色和免疫组化检测。4、HE染色后，在光镜下观察各组下腔静脉血栓病理形态学改变和炎症细胞的表达，采用免