bcl-2高表达诱导头颈部鳞癌细胞部分emt、促进其侵袭和转移机制研究

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1、中南大学博士学位论文Bcl--2高表达诱导头颈部鳞癌细胞部分EMT、促进其侵袭和转移机制研究姓名：左建宏申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：肖志强201209博士学位论文中文摘要摘要头颈部鳞癌(Headandnecksquamouscellcarcinoma，HNSCC)是一种严重威胁人类生命和健康的恶性表皮肿瘤，为世界六大常见恶性肿瘤之一。由于头颈部特殊的解剖结构和复杂的功能，HNSCC的诊断与治疗一直是我们面临的挑战之一。对于早期HNSCC，手术或放疗均能获得良好的效果；但遗憾的是60％的HNSCC就诊时已属晚期(Ⅲ、Ⅳ期)，5年生存率徘徊在1

2、0％---20％之间，况且，在过去50年，生存率仍然没有明显提高。HNSCC易发生淋巴道转移，而且高频率的微转移临床难以发现。因此，揭示HNSCC侵袭与转移机制具有重要的意义。Bel．2基因是一种重要的抗凋亡的基因，在许多生物过程如胎盘的发育、细胞归巢、肿瘤多药耐药、细胞周期调节、血管新生以及基因调控中发挥重要的作用。50％以上的肿瘤有Bcl．2高表达，HNSCC也不例外，通常Bel．2高表达的肿瘤病人疗效以及病人预后差，且与肿瘤的侵袭转移密切相关。然而，Bcl．2高表达促进ttNSCC侵袭与转移的机制尚未阐明。本文研究Bcl-2高表达在HNSCC侵袭与转移中的作

3、用及其机制。为探讨Bcl．2高表达对HNSCC细胞侵袭和转移能力的影响，在建立Bcl．2高表达的稳定转染HNSCC细胞株的基础上，皮下接种肿瘤细胞于BALB／c鼠，观察Bcl．2高表达对HNSCC细胞体内致瘤能力的影响；BALB／c鼠尾静脉注射肿瘤细胞，观察Bcl．2高表达对肿瘤细胞肺部转移能力的影响；采用细胞侵袭、运动和迁移试验等方法分析Bcl．2高表达对肿瘤细胞体外侵袭与转移能力的影响；应用FACS检i贝t]Bcl．2高表达对细胞表面黏附分子(Integrina2，Integrina3，IntegrinIIV,Integrina5，Integrina6，Int

4、egrin131和Integrin134)表达的影响。研究结果显示：Bcl．2博士学位论文中文摘要高表达增强HNSCC细胞的体内致瘤能力和肺转移能力，提高HNSCC细胞的体外运动、迁移和侵袭能力，降低HNSCC细胞黏附能力和细胞表面Integrina2和Inte勘uap1的表达。为研究Bel-2高表达促进删SCC细胞侵袭和转移的机制，应用Westernblotting，FACS，Immunostaining，RT-PCR和Real—timePCR等方法检测Bcl．2高表达对上皮细胞标志蛋白(E．cadheriIl’Cytokeratin，ZOI和Ds93等)和间质

5、细胞标志蛋白(N-cadherin,Fibronecfin和V'maentin)表达的影响等；采用荧光素酶报告基因检测系统分析Bcl．2对N-cadherin启动子活性的影响等；明胶酶谱法研究Bcl．2高表达对金属基质蛋白质酶MMP．9的影响；应用siRNA下调N-cadherin的表达，探讨N-eadherin对转移和侵袭的影响；用ERK，FGFR,EGFR阻断剂U0126，PDl74073和AGl478分别阻断其生物学功能，观察相关信号通路在Bel．2促进心SCC细胞侵袭和转移的作用。结果显示：Bcl．2高表达诱导细胞发生了类似上皮．间质转型(EMD的形态变化

6、，下调上皮细胞标志蛋白(E．cadherin，Cytokeratin，Z01和Ds醪等)的表达，上调间质细胞标志蛋I兰I(N-cadherin，Fibroneetin和、rrmentin)的表达；Bcl．2能激活N．cadhcrin的启动子的活性并上调MMP．9的表达；Bcl．2通过N-cadherin／FGFR撇信号通路促进HNSCC细胞侵袭与转移。研究表明：(1)Bcl．2高表达增强HNSCC细胞体外和体内侵袭转移能力：(2)Bcl一2高表达诱导HNSCC细胞发生类似EMT的细胞表型变化；(3)Bcl．2高表达通过N．cadh枷GFR厄砌o1／2／MMP．9信

7、号通路促进烈SCC细胞的侵袭与转移。我们的结果首次报道：Bel．2具有调控瑚峪CC细胞侵袭和转移的功能。关键词：Bcl一2，头颈部鳞癌，转移，N．钙黏附蛋白，基质金属蛋白酶．9II博士学位论文英文摘要ABSTRACTHeadandNeckSquamousCellCarcinoma(HNSCC)isseriousthreattohumanlifeasamalignantepidermiscancer,whichhasbecomeoneofsixcommoncancerintheworld．DiagnosisandtreatmentofHNSCChasbeenoneo

8、fthec