红麻花药和花瓣抑制消减杂交文库构建及est序列的分析论文

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1、广西大学学位论文原创性和使用授权声明＼黜燃本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索

2、和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。团不保密。(请在以上相应方框内打“√")论文作者签名：f虱碱舐冀莩篓蓁善喜；厂蓼L≥套,4纛修作者联系电话：，5≯fbyV>fp日期：沪‘弓．6．≯O日期训，岁．多．加电子邮箱：乙如“，)7劬ff口匆色“≥·渺红麻花药和花瓣抑制消减杂交文库的构建及EST序列的分捷红麻花药和花瓣抑制消减杂交文库的构建及EST序列的分析摘要红麻(Kenaf)是锦葵科(Malvaceae)木槿属(Hibiscus)一年生韧皮纤维作物，学名为HibiscuscannabinusL．，别名为洋麻、槿麻，是重要

3、的麻纺和造纸原料。本研究以周瑞阳教授选育的红麻P3B的花药和花瓣为材料，进行花药抑制消减杂交文库构建，得到以下结果：(1)成功从红麻花药和花瓣中提取了高质量的总RNA。(2)从总RNA中抽提纯化到高质量无降解的mRNA，并以2鹇mRNA为起始材料成功构建了差减文库，通过杂交效率检测证明差减效果较好。将第二次PCR产物收集纯化后，连接转化大肠杆菌，随机挑取正向文库和反向文库各1440个克隆至96孔细菌培养板培养，菌液PCR检测，挑选条带单一，大小在200"-'750bp的克隆测序。初步挑选正向克隆500个测序，除去非单克隆和高级结构，得到有效序列442条。(3)将测得的442条序列去除载

4、体、接头以及小于100bp的短片段后，进行聚类分析，共得到150个Cluster，将有重叠片段(overlapping)的EST序列进行比对拼接得到150个Unigene。将150条Unigene序列同nt非冗余核酸数据库比对，得到已知同源基因77条，占51．33％；未比对上的序列有49条序列，占32．67％，可能为新基因；预测的同源基因有24条，占16％；同nr非冗余蛋白质数据库比对，有功能注释的序列有78条，占52％；未知功能序列有15条，占10％；预测功能的序列有57条，占38％。(4)根据比对结果，进一步将这些序列进行GO功能注释和COG蛋白质功能预测，按细胞组分分类：细胞(1

5、4个unigene)，细胞器(6个unigene)，蛋白质复合体(4个unigene)按分子功能分类统计：结合功能(35个unigene)，催化活性(59个unigene)，营养库活性(1个unigene)，结构分子活性(2个unigene)，转录调节因子活性(3个unigene)，转运活性(12个unigene)；按生物学过程统计为：细胞内过程(29个unigene)，生理过程(56个unigene)，生物学过程调控(3个unigene)。红麻花药和花瓣抑制消减杂交文库的构建及EST序列的分析按COG库中分类文件将这些功能蛋白分为11类：与胞内转运，分泌及膜泡运输的相关序列占3．33

6、％，与次级代谢产物的生物合成、运输和分解过程的相关序列占10％，与翻译、核糖体结构和生物转化的相关序列占6．67％，与翻译后修饰，蛋白质折叠，分子伴侣相关的序列占6．67％，与能量生产和转化相关的序列占16．67％；与染色质结构和动力学相关的序列占3．33％；与碳水化合物运输和代谢相关的序列占10％；与无机离子运输和代谢相关的序列占3．33％；预测的功能蛋白序列占6．67％；与脂质运输和代谢相关的序列占30％；与转录反应相关的序列占3．33％。(5)通过对比对的结果分析，这些EST序列中，绝大部分编码的基因产物都和代谢有关，特别是一些水解酶，蛋白激酶，氧化还原酶系统等。同时，还有一些功

7、能蛋白如电子载体，离子结合蛋白，水通道蛋白以及Ca2+结合蛋白等。这些蛋白都是与呼吸，跨膜运输以及信号转导紧密相关，说明此时的花药新陈代谢旺盛，这与所取花药所处的发育时期是相关联的。(6)通过对蛋白质的功能注释和代谢路径分析，发现一些EST序列可能与花药组织特异性表达相关。Co而96、conti916、conti醇4和Z7-F5与查尔酮合酶有关，Z1-G9和Z7．F2与MADS-box转录因子有关。(7)通过对选定的8个u11ig锄e进行半定量