斑节对虾ant基因与nm23基因cdna克隆及表达分析

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1、Molecularcloningandexpressionanalysisofadeninenucleotidetranslocaseandnm23fromPenaeusmonodonADissertationSubmittedbyWenWenSunForTheDegreeofMasterofAgronomySupervisor:ProfessorShiGuiJiangSpeciality:AquacultureShanghaiOceanUniversityShanghai201306,P.R.C

2、hinaSouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute,CAFSGuangzhou510300,P.R.ChinaJune,2012上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签

3、名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注主席委员委员委

4、员委员委员委员秘书答辩地点南海水产研究所答辩日期上海海洋大学硕士学位论文斑节对虾ANT基因与nm23基因的cDNA克隆及表达分析摘要斑节对虾（Penaeusmonodon），是当前世界上三大养殖虾类之一，也是我国重要的对虾养殖种类之一。由于对其繁殖与成熟的许多机理仍然不是十分清楚，目前仍采用眼柄切除技术催熟雌虾。但这种催熟方法不利于亲虾的重复使用，且会引起亲虾的高死亡率，不利于斑节对虾养殖业的健康持续发展。因此，必须对斑节对虾性腺发育机制进行研究，发展新的有效的催熟技术，才能有效地提高亲虾的使用率

5、和成活率，节约亲虾成本，促进斑节对虾养殖业的健康持续发展。而阐明斑节对虾性腺发育相关基因的分子调控机理是研制新的有效地催熟技术的重要途径。本研究克隆了与性腺发育调控相关的功能基因——腺苷酸转移酶与nm23基因，并研究其表达调控及作用机理，为进一步开展斑节对虾性腺发育相关基因分子调控机理的研究提供基础资料。1、本研究采用cDNA末端快速扩增技术（RapidAmplificationofcDNAEnds，RACE）获得了腺苷酸转移酶（adeninenucleotidetranslocase，ANT）的

6、cDNA序列，命名为PmANT。该序列全长1388bp，开放阅读框（ORF）为930bp，3’非编码区（UTR）为393bp，5’非编码区（UTR）为65bp。ORF可编码309个氨基酸，分子量为33.62kDa。与所有ANT家族成员一样，PmANT蛋白具有3个重复同源的线粒体跨膜结构域，但不含信号肽和糖基化位点。相似性、同源性及系统进化树分析显示，斑节对虾的ANT基因与凡纳滨对虾的同源性和相似性最高，并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了ANT基因在雌、雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟

7、和成熟精巢的表达情况。结果表明：PmANT的mRNA在雌、雄个体的心脏、性腺、肌肉、眼柄神经、脑神经、淋巴、胃、肠、肝胰腺、鳃和血细胞中均有表达，其中在雄性个体的肌肉中表达量最高，其次为雌性肌肉，而在精巢的表达量最低，且未成熟精巢低于成熟精巢。PmANT的mRNA在卵巢的表达量高于精巢，且在Ⅲ期卵巢表达量最高，Ⅳ期最低。为今后进一步研究该基因在斑节对虾性腺发育中的作用提供基础材料。2、本研究利用RACE技术获得了nm23cDNA序列。其cDNA全长序列为769bp，5’非编码区105bp，3’非编

8、码区208bp，开放阅读框（ORF）为456bp，编码151个氨基酸，分子量为17.01kDa。与许多nm23家族成员一样，其只含有一个功能结构域：NDPk。利用SingalP4.0程序和NetNGlyc1.0在线程序发现，斑I上海海洋大学硕士学位论文节对虾nm23不含信号肽和糖基化位点。相似性、同源性及系统进化树分析显示，斑节对虾的nm23基因与凡纳滨对虾的nm23基因相似性和同源性最高，并聚为一支，其次为拟穴青蟹。采用荧光定量的方法研究了nm23基因在雌、雄个体不同组织、卵巢不