瑞舒伐他汀抑制激素诱导的人骨髓间充质干细胞成脂分化

《瑞舒伐他汀抑制激素诱导的人骨髓间充质干细胞成脂分化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、·８５０·中华临床医师杂志（电子版）２０１１年２月第５卷第３期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｆｅｂｒｕａｒｙ１，２０１１，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．３·短篇论著·瑞舒伐他汀抑制激素诱导的人骨髓间充质干细胞成脂分化杨祖清余国荣施永彦李安军　　【摘要】　目的探讨不同浓度的瑞舒伐他汀对激素诱导的人骨髓间充质干细胞（ＢＭＭＳＣｓ）成脂分化的影响。方法体外分离培养人ＢＭＭＳＣｓ，随机将细胞分为对照组、模型组、实验组（分为瑞舒伐他汀低、中、高浓度３个干预组）。模型组和实验－７组加

2、入１０ｍｏｌ／Ｌ地塞米松培养，第１５天两组停加地塞米松，然后实验组加入不同浓度的瑞舒伐他汀干预。行油红Ｏ染色及定量分析、细胞内ＴＧ含量及ＡＬＰ活性测定。结果模型组细胞内ＴＧ含量明显增加，与对照组比较有统计学意义（P＜０畅０１）；模型组细胞内ＡＬＰ活性增加，与对照组比较有统计学意义（P＜０畅０５）。低浓度组细胞内ＴＧ含量和ＡＬＰ活性略有增高，与模型组比较无统计学意义（P＞０畅０５）；中浓度组细胞内ＴＧ含量降低，ＡＬＰ活性增高，与模型组比较有统计学意义（P＜０畅０５）；高浓度组细胞内ＴＧ含量明显降低，Ａ

3、ＬＰ活性显著增高，与模型组比较有统计学意义（P＜０畅０１）。结论一定浓度的瑞－７舒伐他汀（≥１０ｍｏｌ／Ｌ）能抑制激素诱导的人ＢＭＭＳＣｓ的成脂分化过程，并有促进其成骨分化的作用。【关键词】　间质干细胞；　骨髓祖代细胞；　地塞米松；　成脂分化；　瑞舒伐他汀［１］股骨头坏死可导致髋关节疼痛和功能障碍，重者造成终身残疾，丧失生活自理能力。肾上腺糖皮质激素（简称激素）引起的骨质疏松所导致的股骨头缺血性坏死占非创伤性骨坏死的首位，致残率高，目前认为激素引起的脂质代谢紊乱，与骨质［２唱３］疏松及激素性股骨头坏

4、死的关系密切，但缺乏能逆转骨坏死病理变化进程的理想方法。近年来，动物实验表明，辛伐他汀［４唱５］能抑制激素诱导的骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＭＳＣｓ）的成脂分化、促进成骨分化过程。本实验通过原代培养人ＢＭＭＳＣｓ，给予地塞米松诱导其向脂肪细胞分化，研究他汀类新药瑞舒伐他汀对地塞米松诱导的人ＢＭＭＳＣｓ成脂分化的影响，从而探讨瑞舒伐他汀预防和治疗激素引起的骨质疏松及股骨头坏死的可能性。一、对象与方法１畅对象：选取湖北医药学院附属人民医院骨科８例下

5、肢骨折行髓内钉固定扩髓者，均为无骨代谢疾病的健康成人，且同意提供骨髓。其中男６例，女２例，年龄２２～４３岁。２畅材料：ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基（美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），胎牛血清（杭州四季生物材料有限公司），地塞米松（美国Ｓｉｇｍａ公司），瑞舒伐他汀（美国默克唱杭州默沙东公司），油红Ｏ（美国Ａｍｅｒｅｓｃｏ公司），ＴＧ检测试剂盒、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）试剂盒（上海科华东菱诊断用品有限公司）；主要仪器：ＣＯ２培养箱（美国ＴｈｅｒｍｏＦｏｒｍａ公司），倒置相差显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），全自动生化分析

6、仪（日立７６００唱０２０型，日本日立公司）。［６］３畅人ＢＭＭＳＣｓ的分离与培养：采用全骨髓贴壁分离法，具体步骤参考文献。４２　　４畅人ＢＭＭＳＣｓ的成脂分化及瑞舒伐他汀的干预过程：取人ＢＭＭＳＣｓ细胞培养７ｄ，以３×１０／ｃｍ接种于６孔培养板内，随机将细胞分为对照组、模型组、实验组。实验组再分３个亚组（即瑞舒伐他汀低、中、高浓度干预组）。对照组不加地塞米松－７和瑞舒伐他汀干预，每孔加入２ｍｌ含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液培养，模型组和实验组加入浓度为１０ｍｏｌ／Ｌ的地－８－７－６塞米松液

7、干预细胞，培养第１５天停加地塞米松，实验组分别用低浓度（１０ｍｏｌ／Ｌ）、中浓度（１０ｍｏｌ／Ｌ）、高浓度（１０ｍｏｌ／Ｌ）的瑞舒伐他汀干预。每例标本培养对照组２板，模型组２板，每浓度组各２板。２３ｄ后终止培养。以上重复三次。５畅油红Ｏ、苏木素染色：培养第２１天，弃孔板内培养基，ＰＢＳ漂洗细胞，每孔加入１０％的甲醛磷酸盐缓冲液２ｍｌ，固定３０ｍｉｎ，漂洗细胞，加油红Ｏ染色液２ｍｌ，染色３５ｍｉｎ，双蒸水漂洗细胞３遍后，每孔再加入苏木素染色液２ｍｌ，室温染色４０ｓ，双蒸水漂洗，照相。红染细胞为阳性细胞

8、，挑选阳性细胞最多的部位，在×１００的放大倍数下随机采集２０个视野，利用Ｉｍａｇｅｐｒｏ唱ｐｌｕｓ６畅０软件，计算每个视野下阳性细胞的总面积。６畅细胞内ＴＧ含量测定：培养第２３天，吸弃培养液，每孔加入ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基１ｍｌ，用细胞刮器收集细胞，用氯仿∶甲醇（２∶１）混合液抽提５ｍｉｎ，将有机相３７℃水浴，使甲醇、氯仿挥发后，用ＴＧ试剂盒在全自动生化分析仪上测定ＴＧ含量。７畅ＡＬＰ活性测定：培养第２３天，吸弃培养液，每孔加入ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基１ｍｌ，用细胞刮器